同种异体脂肪干细胞组织工程骨修复管状骨缺损

摘要

目的：脂肪干细胞（Adipose-Derived Stem Cell, ADSCs）因具有良好的成骨分化潜能而常被用来做为骨组织工程的种子细胞。本实验在脂肪干细胞提取、培养及成骨诱导分化所做工作的基础上，建立兔尺骨缺损模型，进一步探讨同种异体脂肪干细胞组织工程骨修复管状骨缺损的可行性。
　　方法：（1）获取新西兰大白兔的肩胛部脂肪，分离培养具有多向分化潜能的脂肪干细胞；（2）以成骨诱导液培养的第3代细胞（P3）为实验组，LG-DMEM作为对照组。DNA定量法测定细胞的增殖曲线、定性检测碱性磷酸酶（Alkaline Phosphatase, ALP）及细胞外钙盐沉积情况；（3）P3兔ADSCs与脱钙骨材料复合后，体外成骨诱导培养（LG-DMEM设为对照）。用扫描电镜对细胞-材料复合物的表面进行观察、DIO标记细胞后采用激光共聚焦显微镜观察细胞生长情况、定量检测碱性磷酸酶及细胞外钙离子；（4）制造兔两侧尺骨临界大小（15mm长度）的缺损，分别植入兔ADSCs-脱钙骨复合物体（实验组）和单纯脱钙骨材料（对照组）；（5）12周后取样本，行三维CT和组织学检测，观察成骨情况。
　　结果：兔ADSCs体外增殖能力强，且具有多向分化潜能；与脱钙骨材料具有良好的细胞相容性；细胞材料复合物植入12周后，三维CT显示实验组有新生骨基质长成，对照组未见骨组织生成。组织学检测显示实验组缺损处被典型的骨组织取代，可见新生骨小梁附着于脱钙骨表面，而对照组中只有少量的骨组织和纤维组织充填。
　　结论：通过正确的途径可以证实兔 ADSCs能在脱钙骨支架材料上很好的粘附和生长，兔ADSCs-脱钙骨材料复合物植入体内能成功修复临界大小的管状骨缺损。

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引言

参考文献

第一部分 兔脂肪干细胞的分离培养与诱导分化

前言

1. 材料和试剂

2. 实验方法

3. 实验结果

4. 讨论

本章结论

参考文献

第二部分 同种异体兔脂肪干细胞复合脱钙骨材料修复兔尺骨缺损

前言

1. 材料和试剂

2. 实验方法

3. 实验结果

4. 讨论

本章结论

参考文献

全文结论

本课题创新点

致谢

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综述: 种子细胞在骨组织工程中的研究进展