贯叶连翘中金丝桃素提取物对鼻咽癌细胞CNE-1和CNE-2的影响

摘要

光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)是对恶性肿瘤的一种有效的治疗手段,而光源和光敏剂是PDT的两大因素。PDT中常用的激光光源由于适用波长少、成本高制约了PDT的发展；而以往的PDT治疗中所用的光敏剂由于种种缺点造成了治疗效果的不确定,也影响了PDT的推广应用。 近年来人们开始用PDT技术进行治疗鼻咽癌的实验研究。金丝桃素是从贯叶连翘中提取的一种颇有潜力的高效PDT光敏剂,但也存在提取困难价格昂贵的问题。本课题就从这些方面着手,探索了以发光二极管(LED)为光源代替激光光源、以贯叶连翘中金丝桃素提取物为光敏剂的光动力治疗对鼻咽癌细胞CNE-2和CNE-1的体外杀伤效应,希望找到一种改良的PDT方法,在保证疗效的同时降低治疗成本,从而为PDT推广应用提供参考。主要的研究内容有： (1)用薄层色谱及HPLC法对金丝桃素样品进行简单分析。 (2)进行了改良PDT方法的条件优化。以CNE-2鼻咽癌细胞为例,分析金丝桃素标准品的吸收光谱及细胞对金丝桃素标准品的吸收,用两种不同波长范围的光源激发金丝桃素进行体外细胞毒试验,并研究了给药-光照的时间间隔等因素对PDT效果的影响,以MTT比色法来比较各种条件下的药效作用。 (3)研究了金丝桃素标准品对人鼻咽癌细胞CNE-2和CNE-1体外PDT效应,通过检测细胞对金丝桃素标准品的吸收来确定给药后与光照的时间间隔,用显微镜观察、MTT比色法、流式细胞仪检测细胞周期和凋亡等方法来评价金丝桃素的抗癌效果。 (4)研究了金丝桃素提取物对人鼻咽癌细胞CNE-2和CNE-1体外应效应。 (5)研究了伪金丝桃素对CNE-2和CNE-1的PDT效果。 本文的主要研究结果如下： (1)波长处于金丝桃素最大吸收峰(590 nm)处的黄色LED光源激发的PDT效果最好；给药后6 h光照比给药后1 h光照效果好,这与给药后细胞内药物浓度达到最高峰的时间一致。 (2)光活化的金丝桃素对人鼻咽癌细胞CNE-2和CNE-1的周期有显著影响,并能诱导其凋亡。 (3)光活化的金丝桃素提取物对人鼻咽癌细胞CNE-2和CNE-1均有显著的体外杀伤效应,其效果随着金丝桃素浓度与光照时间(光照能量)的增加而增加。 (4)伪金丝桃素桃素对人鼻咽癌细胞CNE-2和CNE-1具有一定的杀伤效应。 本文的研究结果表明：以LED代替激光光源为光源、以贯叶连翘中金丝桃素提取物为光敏剂的光动力疗法对人鼻咽癌细胞CNE-2和CNE-1呈现出显著的体外细胞毒作用,这种改良的PDT治疗方法在鼻咽癌治疗中具有广阔的前景。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语表

声明

第一章绪论

1.1贯叶连翘的概论

1.1.1贯叶连翘的化学成分

1.1.2贯叶连翘的药理作用

1.2光动力疗法

1.2.1光动力疗法的基本机制

1.2.2光动力疗法的现状

1.2.3光动力治疗的要素

1.2.4光动力疗法未来的研究方向

1.3 PDT对鼻咽癌细胞的影响

1.3.1 PDT鼻咽癌细胞的杀伤作用机制

1.3.2 PDT在鼻咽癌中的应用

1.3.3 PDT治疗鼻咽癌的优点

1.4本课题的研究意义及研究内容

1.4.1本课题的研究意义

1.4.2本课题的研究内容

第二章HY样品的制备与分析方法概述

2.1实验材料

2.1.1样品

2.1.2主要试剂

2.1.3主要的仪器设备

2.2实验方法

2.2.1样品的制备

2.2.2标准品溶液的配制

2.2.3金丝桃素样品的薄层色谱(TLC)分析

2.2.4金丝桃素样品的HPLC分析

2.3结果与讨论

2.3.1金丝桃素样品的薄层色谱图

2.3.2金丝桃素样品的HPLC分析

第三章HY-PDT实验条件及对CNE-2细胞的PDT效应

3.1实验材料

3.1.1细胞株

3.1.2 HY样品

3.1.3主要试剂

3.1.4常用溶液

3.1.5主要的仪器设备

3.2实验方法

3.2.1 HY标准品与样品的吸收光谱分析

3.2.2 CNE-2细胞株培养

3.2.3细胞生长曲线的测定

3.2.4给药方式

3.2.5 HY在避光条件下对细胞的抑制作用

3.2.6细胞对药物的吸收实验

3.2.7不同波长的光源的光照实验

3.2.8给药后不同间隔时间光照的药效比较

3.2.9给药后不同光照时间(光照剂量)的药效比较

3.2.10 MTT比色法分析

3.2.11 HY标准品对CNE-2细胞周期的影响

3.2.12 HY标准品对CNE-2细胞凋亡的影响

3.2.13 HY样品、HY标准品和HP的药效比较

3.2.14 PHY对CNE-2的抑制作用

3.2.15统计分析

3.3结果与讨论

3.3.1 HY标准品与提取物的吸收光谱

3.3.2细胞的生长曲线

3.3.3 CNE-2细胞对HY标准品的吸收曲线

3.3.4避光条件下HY标准品对细胞的抑制作用

3.3.5不同波长光源诱导HY对细胞的体外杀伤效应比较

3.3.6给药后不同间隔时间光照的细胞毒作用

3.3.7不同光照时间的细胞毒作用

3.3.8细胞形态学变化

3.3.9 HY对CNE-2细胞周期的影响

3.3.10 HY对CNE-2细胞凋亡的影响

3.3.11 HY提取物、HY标准品和HP对CNE-2的抑制作用比较

3.3.12 PHY对CNE-2的抑制作用

3.4本章小结

第四章HY对CNE-1的PDT效应

4.1实验材料

4.1.1细胞株

4.1.2主要试剂

4.1.3主要的仪器设备

4.2实验方法

4.2.1 CNE-1细胞株培养

4.2.2 CNE-1细胞生长曲线的测定

4.2.3鼻咽癌细胞CNE-1对药物的吸收实验

4.2.4 HY标准品对CNE-1的抑制作用

4.2.5 HY标准品对CNE-1细胞周期的影响

4.2.6 HY标准品对CNE-1细胞凋亡的影响

4.2.7 PHY对CNE-1的抑制作用

4.2.8 HY样品、HY标准品和HP的抑制作用

4.2.9数理统计

4.3试验结果

4.3.1 CNE-1生长曲线

4.3.2 CNE-1细胞对HY标准品的吸收曲线

4.3.3 HY对CNE-1细胞的抑制作用

4.3.4 HY对CNE-1细胞周期的影响

4.3.5 HY对CNE-1细胞凋亡的影响

4.3.6 PHY对CNE-1的抑制作用

4.3.7 HY样品、HY标准品和HP的药效比较

4.4本章小结

结论与展望

参考文献

攻读硕士学位期间取得的研究成果

致 谢