断肠草中钩吻碱的检测方法研究

摘要

断肠草又名钩吻、胡蔓藤、大茶药等，为马钱科胡蔓藤属植物。该植物产于亚洲和北美，我国主要分布于浙、闽、粤、滇、黔、桂等地的灌木丛中。断肠草性温味辛、苦、有大毒，是有名的剧毒植物。从断肠草植株中分离出的重要毒素成分叫钩吻碱，是一种氧化吲哚型生物碱。断肠草引起的食物中毒，轻则头晕、恶心、呕吐、腹痛、乏力，重则出现抽搐、昏迷、肺水肿、呼吸和循环衰竭，甚至死亡。因此除了对断肠草在形态特征上充分认识外，还要同时建立一套快速、简便的断肠草中钩吻碱提取、鉴定和含量测定方法，为抢救中毒患者提供可靠的实验室依据。 本文通过对断肠草与相似的中药金银花的形状特征进行比较鉴别，使人们能从植物的外观形状上辨认出断肠草；另外对断肠草中钩吻碱44种化学成分的理化性质、化学结构、分子量；还有钩吻碱的毒性以及在医疗和禽畜的应用等方面了解研究。根据物质之间具有相似相溶的特性，对怀疑因断肠草引起的食物中毒检品，首先采用5％浓度的氢氧化钠溶液浸泡振荡提取，只溶解样品中的碱性成分，去除酸性物质和其它杂质，在提取过程中同时净化提取液，再利用对植物有高效率萃取的超声波提取，进一步提高提取率，替代现有《中国药典》等采用酸碱溶液多次回流提取断肠草中钩吻碱的传统方法，达到既能缩短实验时间，又能提高提取率的目的。并建立以254nm荧光薄层板分离断肠草中钩吻碱的薄层色谱(TLC)快速鉴别方法，以及采用DB—5MS毛细管色谱柱、电子轰击源(EI)、选择离子方式(SIM)、钩吻素甲的主要特征峰设定为：m/z 108(基峰)、m/z 251、m/z 279和m/z 322(分子离子峰)，可靠性和准确性更高的气相色谱/质谱联用仪(GC/MS)测定方法。旨在为具有不同仪器条件的实验室提供快速、准确的分析方法。近两年来，通过采用上述的TLC和GC/MS两种分析方法，对我省韶关、清远等地发生怀疑因断肠草引起的食物中毒事件检验，检测结果与医治临床症状、现场调查结果完全一致，证明所建立的检验方法能够满足食物中毒快速、准确无误的分析要求。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章 绪论

1.1断肠草的定义

1.2形态特征

1.3分布及种类结构

1.4毒性

1.5钩吻碱的医学功效和作用

1.5.1免疫调节

1.5.2抗肿瘤

1.5.3镇痛镇静

1.5.4促进造血功能

1.5.5扩瞳

1.5.6对皮肤病的作用

1.5.7对禽畜的作用

1.6国内外钩吻碱提取与检验方法的研究状况

1.6.1提取方法

1.6.2检验方法

1.7检测的意义和目的

第二章断肠草中钩吻碱提取方法的研究

2.1引言

2.2钩吻素甲(Geliemine)的性质

2.3材料

2.3.1原辅材料

2.3.2主要试剂

2.3.3仪器设备

2.4实验方法

2.4.1样品的前处理

2.4.2提取方法的研究

2.5结果与讨论

2.5.1样品浸泡液对钩吻碱提取率的影响

2.5.2有机溶剂对钩吻碱提取率的影响

2.5.3不同提取方式对钩吻碱提取率的影响

2.6本章小结

第三章薄层色谱法检测断肠草中钩吻碱的研究

3.1引言

3.2材料

3.2.1原辅材料

3.2.2主要试剂

3.2.3仪器设备

3.3实验方法

3.3.1样品的前处理

3.3.2薄层色谱法

3.4结果与讨论

3.4.1洗板方式的选择

3.4.2点样方法的确定

3.4.3展开方式的影响

3.4.4显色方法的影响

3.4.5环境因素的影响

3.4.6检测限量的研究

3.5本章小结

第四章气相色谱/质谱联用仪(GC/MS)测定方法研究

4.1引言

4.2材料

4.2.1原辅材料

4.2.2主要试剂

4.2.3仪器设备

4.3实验方法

4.3.1样品的前处理

4.3.2气相色谱/质谱联用仪(GC/MS)

4.4结果与讨论

4.4.1定性和定量检测方法的选择

4.4.2检测限量的研究

4.4.3钩吻素甲提取率的研究

4.4.4检测精密度的研究

4.5本章小结

第五章钩吻碱检测方法的应用研究

5.1引言

5.2材料

5.2.1原辅材料

5.2.2主要试剂

5.2.3仪器设备

5.3方法

5.3.1样品的前处理

5.3.2仪器分析方法

5.4结果与讨论

5.4.1广东部分地区钩吻碱数量比较

5.4.2广东部分地区断肠草中钩吻碱含量差异

5.4.3食物中毒样品检测

5.5本章小结

结论与展望

参考文献

攻读硕士学位期间发表论文情况

致谢