复方伯氨喹片含量测定方法的研究

摘要

目的：
　　复方伯氨喹片为青蒿研究中心自行研制的新型抗疟药，其两个有效成分为青蒿素(Artemisinin，ART)、磷酸伯氨喹(primaquine phosphate，PMQ)。中国药典2010版对青蒿素原料的含量测定方法作了修改，由前版的UV法改为HPLC法，而磷酸伯氨喹原料的含量测定方法未作修改，原料的含量测定方法为电位滴定法，其制剂磷酸伯氨喹片的含量测定方法为永停法。通过查阅文献发现青蒿素含量测定方法的研究报道很多，UV法、HPLC法等测定方法已趋于成熟，而磷酸伯氨喹含量测定方法的研究相对少很多，目前还没有复方伯氨喹片含量测定方法的相关报道。
　　本文旨在建立专属性强、准确、简便的分析方法，采用UV法和HPLC法测定复方伯氨喹片中青蒿素的含量测定方法，采用永停法、UV法和HPLC法测定复方伯氨喹片中磷酸伯氨喹的含量测定方法，为复方伯氨喹片质量标准中含量测定方法的建立提供理论依据。
　　方法：
　　青蒿素的UV法含量测定用外标法，以吸收值对ART进行定量分析。乙醇与0.2%NaOH溶液混合后加热开环，291nm波长处测定。
　　青蒿素的HPLC法含量测定用外标法，以峰面积对ART进行定量分析。理论板数按青蒿素峰计算不低于3000。
　　色谱条件色谱柱：Diamonsil ODS250×4.6mm，5μm；流动相：乙腈-水（68：32）为流动相；流速：0.8mL·min-1；检测波长：216nm；柱温：25℃；进样量：20μL。
　　磷酸伯氨喹的永停法含量测定用滴定度，以本液的消耗量与对氨基苯磺酸的取用量进行定量分析。亚硝酸钠滴定液的配制与标定。
　　磷酸伯氨喹的UV法含量测定用外标法，以吸收值对PMQ进行定量分析。0.01mol·L-1盐酸溶液，264nm波长处测定。
　　磷酸伯氨喹的HPLC法含量测定用外标法，以峰面积对PMQ进行定量分析。理论板数按磷酸伯氨喹峰计算不低于3000。
　　色谱条件色谱柱：Diamonsil ODS250×4.6mm，5μm；流动相：乙腈-0.25%二乙胺溶液（PH4.0）（30：70）为流动相；流速：0.8mL·min-1；检测波长：263nm；柱温：25℃；进样量：20μL。
　　结果：
　　青蒿素的UV法含量测定方法准确度高，平均回收率为102.1%，RSD为1.23%（n=9）；精密度好，平均含量为100.5％，RSD=1.36％（n=9）；ART在2.4～12μg·mL-1的范围内，吸光度与浓度间呈现良好的线性，线性方程为Y=16.4436X-0.08059,r=0.9999(n=6)；供试品溶液在分析浓度下，24小时内基本稳定。
　　青蒿素的HPLC法含量测定方法准确度高，平均回收率为99.8%，RSD为1.12%（n=9）；精密度好，平均含量为100.5％，RSD=1.16％（n=9）；ART在8～40μg的范围内，峰面积与浓度间呈现良好的线性，线性方程为Y=39086.6X-3002.79，r=0.9999(n=5)；LOQ为0.48μg（S/N=10）；供试品溶液在分析浓度下，24小时内基本稳定。
　　磷酸伯氨喹的永停法含量测定方法准确度高，平均回收率为100.5%，RSD为0.18%（n=9）；精密度好，平均含量为103.1％，RSD=0.36％（n=9）；PMQ在0.1～0.5g的范围内，消耗滴定液体积与称样质量间呈现良好的线性，线性方程为Y=44.829X+0.1028，r=0.9999(n=6)。
　　磷酸伯氨喹的UV法含量测定方法准确度高，平均回收率为102.0%，RSD为1.20%（n=9）；精密度好，平均含量为97.8％，RSD=1.40％（n=9）；PMQ在4.8～24μg·mL-1的范围内，吸光度与浓度间呈现良好的线性，线性方程为Y=27.9934X-0.14309，r=0.9998(n=6)；供试品溶液在分析浓度下，24小时内基本稳定。
　　磷酸伯氨喹的HPLC法含量测定方法准确度高，平均回收率为99.9%，RSD为1.31%（n=9）；精密度好，平均含量为101.0％，RSD=0.46％（n=9）；PMQ在0.032～1.12μg的范围内，峰面积与浓度间呈现良好的线性，线性方程为Y=3355420X-20691，r=0.9999(n=6)；LOQ为3×10-3μg（S/N=10）；供试品溶液在分析浓度下，24小时内基本稳定。
　　结论：
　　本文首次采用UV法、HPLC法测定复方伯氨喹片中的青蒿素含量，以及采用永停法、UV法和HPLC法测定复方伯氨喹片中的磷酸伯氨喹含量，最终确立用HPLC法测定复方伯氨喹片中的青蒿素和磷酸伯氨喹含量。方法专属性强、精密度好、准确度高、测定条件下线性好、灵敏度高、供试品溶液稳定，方法快速简便，适于复方制剂定量测定。所建立方法可作为建立质量标准方法的依据。

目录

声明

引言

第1章 文献研究

1.1 有关疟疾

1.1.1 疟疾概况

1.1.2 疟疾流行状况

1.2 疟疾的治疗研究进展

1.2.1 疟疾的单药治疗研究

1.2.2 疟疾的联合治疗研究

1.3 复方伯氨喹片中青蒿素和磷酸伯氨喹的抗疟作用和机理

1.3.1 青蒿素的抗疟作用和机理

1.3.2 磷酸伯氨喹的抗疟作用和机理

1.3.3 复方伯氨喹片的抗疟作用和机理

1.4 复方伯氨喹片中青蒿素和磷酸伯氨喹检测方法的研究

1.4.1 青蒿素

1.4.2 磷酸伯氨喹

1.4.3 复方伯氨喹片检测方法的实验研究思想

第2章 实验研究

2.1 复方伯氨喹片中青蒿素含量测定的方法学研究

2.1.1 紫外分光光度法含量测定方法学建立

2.1.2 高效液相色谱法含量测定方法学建立

2.1.3 复方伯氨喹片中青蒿素含量测定方法的确定

2.1.4 三批样品含量测定

2.2 复方伯氨喹片中磷酸伯氨喹含量测定的方法学研究

2.2.1 永停滴定法含量测定方法学建立

2.2.2 紫外分光光度法含量测定方法学建立

2.2.3 高效液相色谱法含量测定方法学建立

2.2.4 复方伯氨喹片中磷酸伯氨喹含量测定方法的确定

2.2.5 三批样品含量测定

结语

参考文献

附录

研究生在学期间发表论文情况

致谢