土茯苓质量评价体系初步研究

摘要

目的:通过对土茯苓的生药学、有效部位含量、有效成分含量、指纹图谱进行研究，初步建立土茯苓的模式指纹图谱及其质量评价体系，为土茯苓药材、饮片及其制品的质量控制提供科学依据。
　　方法:
　　1.依据《中国药典》2010版一部中规定对土茯苓饮片进行性状鉴别及淀粉粒的显微鉴别。
　　2.采用正交试验设计优化土茯苓饮片中总黄酮的提取工艺及其显色条件；采用紫外分光光度法，以芦丁为对照，NaNO2-Al(NO3)3-NaOH对供试品显色，在波长500nm处测定土茯苓饮片中总黄酮含量。
　　3.采用正交试验设计优化土茯苓饮片中花旗松素、落新妇苷及白藜芦醇的提取工艺；采用RP－HPLC法， Kromasil C18（250×4.6mm，5μm）色谱柱，以甲醇-0.5%磷酸水（34∶66）为流动相洗脱，流速1mL·min-1，柱温30℃，在200nm-800nm波长范围内同时测定土茯苓饮片中花旗松素、落新妇苷及白藜芦醇的含量。
　　4.采用RP－HPLC法，Kromasil C18（250×4.6mm，5μm）色谱柱，以甲醇-0.5%磷酸水（v/v）梯度洗脱，流速0.8 mL·min-1，柱温为室温，检测波长290nm，对土茯苓饮片进行指纹图谱研究。
　　结果:
　　1.性状观察结果显示，1～12号样品性状特征基本相同，符合2010版《中国药典》一部中土茯苓鉴别项下的形态特征，13和14号样品的形态特征不符合规定。淀粉粒观察结果显示，1～13号样品的淀粉粒形态特征基本相同，符合2010版《中国药典》一部中土茯苓鉴别项下淀粉粒的形态特征，14号样品不符合规定。
　　2.正交试验设计优化筛选出总黄酮提取工艺参数，其最佳工艺为料液比为1:50，加入的提取溶剂为50%乙醇水溶液，超声提取60min。各产地土茯苓总黄酮的含量在2.9%～18.7%之间，其中产地为越南的样品含量最高，产地为广东化州的样品含量最低；市售公司采购的饮片含量均较高，且含量较接近；各土茯苓正品中总黄酮含量差异较大，两个混淆品中总黄酮的含量均偏低。
　　3.正交试验设计优化筛选出的花旗松素、落新妇苷及白藜芦醇提取工艺参数，其最佳工艺为加入60%乙醇水溶液30mL，超声提取35min。各产地土茯苓有效成分的含量测定结果显示，花旗松素的含量在0.00869%～0.06996%之间，其中湖南、广西上思县、越南河内的含量低，无法检测；落新妇苷的含量在0.19669%～4.90443%之间，其中湖南、越南河内、广东化州均低于0.45%；白藜芦醇的含量在0.0137%～0.1551%之间。
　　4.通过MATLAB对各批样品进行相似度评价，结果显示，各指纹图谱总体的相似度较低，其中产区较接近的广东罗定中医院与香港两个样品的相似度较高，而采集于广西的两个样品及两个混淆品相似度较低；通过主成份分析，可以把6批样品分成模式I和模式 II两类。
　　结论:
　　1.根据2010版《中国药典》一部规定，对采集的14个样品进行性状及显微鉴定，判断购于湖南和越南河内的样品为土茯苓混淆品。
　　2.以总黄酮的含量为指标，采用正交试验设计优化土茯苓总黄酮提取工艺。并在此基础上建立了土茯苓中总黄酮的定量分析方法，对14个不同来源的土茯苓样品中总黄酮进行含量测定。测定结果显示，14个样品的总黄酮含量在2.9%～18.7%之间，各产地样品含量差异较大，其中市售的饮片中总黄酮含量较高，混淆品的含量较低。
　　3.采用正交试验设计对土茯苓中三个活性成分花旗松素、落新妇苷及白藜芦醇的提取工艺进行研究，并建立其同时测定的HPLC含量测定方法，对14个不同来源的土茯苓样品进行含量测定。在14个样品中，花旗松素的含量在0.00869%～0.06996%之间，其中湖南、广西上思县、越南河内的含量低，无法检测；落新妇苷的含量在0.19669%～4.90443%之间，其中湖南、越南河内、广东化州均低于0.45%；白藜芦醇的含量在0.0137%～0.1551%之间。2个混淆品的各指标成分的含量均较低，其中花旗松素含量均低于检测限，落新妇苷含量均少于0.45%，白藜芦醇含量均少于0.022%。表明花旗松素可以作为土茯苓质量评价的指标。
　　4.建立了土茯苓饮片的HPLC指纹图谱，采用MATLAB软件对不同来源土茯苓正品及混淆品的指纹图谱进行了辨别、相似度评价以及主成份分析，从而建立了一个较为全面的土茯苓内在质量控制的方法。从结果中分析，符合 I类指纹图谱的样品质量较优，同时也与上述含量测定指标成分研究的结果一致。
　　5.在2010版《中国药典》的基础上初步对土茯苓的质量评价作出如下改进
　　5.1性状：切面颜色呈淡棕色、棕色或类白色。
　　5.2显微：药材粉末呈淡棕色或类白色，淀粉粒甚多，单粒类球形、多角形或类方形，直径8~50μm，脐点裂缝状、星状、三叉状、四叉状或点状，大粒可见层纹；复粒由2~4分粒组成。
　　5.3含量测定：按干燥品计算，含总黄酮不得少于4%，含花旗松素不得少于0.01%，含落新妇苷不得少于0.45%，含白藜芦醇不得少于0.022%。

目录

声明

引言

第一章 文献研究

1.1 土茯苓研究综述

1.2 评价与思路

第二章 土茯苓生药学研究

2.1仪器、试药及样品

2.2 方法与结果

2.3 小结

第三章 土茯苓中主要有效成分含量测定研究

3.1 总黄酮含量测定

3.2 花旗松素、落新妇苷及白藜芦醇含量测定

第四章 土茯苓高效液相指纹图谱研究

4.1仪器、试药与样品

4.2 方法与结果

4.3 小结

第五章 讨论与结论

5.1讨 论

5.2 结 论

结语

附录

附录1 不同来源的土茯苓及其混淆品

附录2 土茯苓黄酮类成分紫外波长扫描相关图谱

附录3 土茯苓有效成分含量测定HPLC相关图谱

附录4 不同洗脱条件下HPLC指纹图谱

参考文献

致谢