异芹菜脑对大鼠胸主动脉的舒张作用及其机制研究

摘要

目的: 草药隔山香是我国特有植物，具有行气止痛、活血化瘀等功效，临床上多用于治疗因平滑肌痉挛引起的心绞痛、胃痛、腹痛等疾病，疗效显著，但相关药效物质基础及作用机制并不清晰。异芹菜脑含量较高，可作为其脂溶性苯丙素的代表性成分。本课题考察隔山香不同极性部位及异芹菜脑对大鼠主动脉血管环舒张的影响，探讨异芹菜脑对血管平滑肌细胞增殖、内皮细胞NO释放及eNOS表达的影响，从器官到细胞水平探讨了隔山香对血管舒张的影响及可能作用机制，有助于阐释隔山香“行气止痛”的科学内涵。 方法: 1、建立离体大鼠胸主动脉血管环实验模型，采用去甲肾上腺素和氯化钾预收缩血管，观察隔山香不同极性部位萃取物及异芹菜脑对血管环张力的影响，同时观察阻断剂L-NAME对异芹菜脑舒张血管环作用的影响。 2、采用硝酸还原酶法测定异芹菜脑干预前后血管环中NO水平的变化。 3、采用比色法检测异芹菜脑干预前后人脐静脉内皮细胞中NO含量的变化，并利用Western Blot技术检测 Anti-eNOS、Anti-phospho-eNOS(PSER1176)的表达。 4、离体培养血管平滑肌细胞，利用CCK-8检测不同浓度异芹菜脑对血管平滑肌细胞增殖的影响。 结果: 1、隔山香不同极性部位萃取物对KCl(60mmol/L)预收缩内皮完整血管环具有一定的舒张作用(P＜0.01)，石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、水层萃取物作用30min后舒张率依次为92.38％、91.93％、59.81％、12.20％。异芹菜脑对KCl(60 mmol/L)预收缩内皮完整和去内皮血管环张力未见明显影响(P＞0.05)。 2、异芹菜脑溶液可使NE预收缩的内皮完整血管环舒张(P＜0.05)，不同浓度的异芹菜脑溶液作用30min后舒张率依次为31.57％、24.12％、28.99％;但去内皮的血管则不显示舒张的效果(P＞0.05)。 3、L-NAME(0.1 mmol/L)预处理内皮完整的血管环，可使异芹菜脑的舒张作用消失(P＞0.05)。 4、异芹菜脑在给药后的0.5h、1h、12 h均可增加离体大鼠胸主动脉血管环中NO的表达(P＜0.05)，各时间点对应的NO浓度(μ mol/L)依次为88.34、93.69、105.21。 5、异芹菜脑溶液在0.5h、1h、12 h、24h能明显促进VEC内NO的合成与释放(P＜0.05)，各时间点对应的总NO2-浓度(μ mol/L)依次为35.95、43.36、54.44、61.53; Western blot结果显示异芹菜脑能提高内皮细胞eNOS的表达。 6、2-2×10-4μg/ml的异芹菜脑溶液对VSMC均有一定的促增殖作用(P＜0.05)，浓度依赖性不强;随着浓度的增大则呈现抑制VSMC增殖作用的趋势，大于100μ g/ml时可明显抑制VSMC的增殖(P＜0.05)。 结论: 1、隔山香不同极性部位对含内皮离体大鼠胸主动脉血管环具有一定的舒张作用，乙酸乙酯、石油醚部位效果尤为明显;苯丙素类成分异芹菜脑对血管的舒张作用呈现对内皮依赖性，通过促进NO的释放使血管舒张。 2、异芹菜脑可促进VEC合成释放NO，并能提高eNOS的表达。 3、异芹菜脑对VSMC增殖有双向调节作用，在低浓度范围内(2-2×10-4μg/ml)可促进VSMC的增殖，促增殖最佳浓度约为2×10-3μg/ml;在高浓度（大于100μg/ml）时则抑制VSMC的增殖。

目录

声明

摘要

引言

第一章 文献研究

1．1 隔山香的研究进展

1．2 血管的收缩舒张机制

1．2．1 血管的简介

1．2．2 血管的收缩机制

1．3 一氧化氮(NO)

1．4 中草药对血管的舒张作用研究概况

第二章 实验研究

2．1 隔山香各极性部位萃取物及异芹菜脑对大鼠胸主动脉血管环的影响研究

2．1．1 材料与方法

2．1．2 实验内容

2．1．3 实验结果

2．1．4 讨论

2．1．5 小结

2．2 大鼠胸主动脉血管环中NO水平的测定

2．2．1 材料与方法

2．2．2 实验内容

2．2．3 实验结果

2．2．4 讨论

2．2．5 小结

2．3 异芹菜脑对HUVEC中NO含量及其eNOS表达的影响

2．3．1 材料与方法

2．3．2 实验方法

2．3．3 实验结果

2．3．4 讨论

2．3．5 小结

2．4 异芹菜脑对平滑肌细胞增殖的影响

2．4．1 材料与方法

2．4．2 实验内容

2．4．3 实验结果

2．4．4 讨论

2．4．5 小结

结语

参考文献

附录

在校期间发表论文情况

致谢