附子现代炮制品的急性毒性及药效学评价研究

摘要

目的:
　　附子首载于《神农本草经》，具有回阳救逆，补火助阳，散寒止痛的功效。但是附子本身具有毒性，需要经过炮制后方可入药。研究表明，传统炮制方法操作繁琐，炮制周期较长，且炮制过程中有效成分损失严重，质量参差不齐，难以保证药材质量的稳定性。
　　课题组前期结合饮片生产需要，已对附子高压蒸制工艺、高温烘制工艺和微波炮制工艺进行了深入的研究，从化学成分上确定了其最佳炮制工艺。但新型炮制工艺能否完全取代传统的炮制工艺，为了确保其科学性，本项目将进一步从毒理学与药效学的层面，综合评价附子现代炮制工艺的安全性和有效性。
　　方法:
　　1.文献资料的研究
　　对附子的炮制工艺、毒理学、药理学作用等方面进行总结与分析，为制定可行的实验方案提供参考。
　　2.附子不同炮制品及其煎煮液的含量测定
　　采用课题组前期所优选出来的高温、高压、微波炮制工艺及黑顺片的炮制工艺对同一批次的附子药材进行炮制。通过HPLC法分别测定附子药材及其炮制品以及炮制品煎煮液中6种主要生物碱的含量。
　　3.附子不同炮制品煎煮液的急性毒性研究
　　通过急毒实验对附子4种炮制品进行安全性评价。
　　4.小鼠阳虚模型的建立及回阳救逆实验研究
　　采用氢化可的松进行阳虚造模，造模成功后给予4种炮制品的不同浓度的煎煮液，评价其对于阳虚小鼠“回阳救逆”的作用。
　　5.附子不同炮制品煎煮液对阳虚小鼠耳廓微循环的作用研究
　　采用氢化可的松进行阳虚造模，同时给予4种炮制品的不同浓度的煎煮液，评价其对于阳虚小鼠耳廓微循环的作用。
　　6.附子不同炮制品煎煮液对离体大鼠心脏强心作用的比较
　　采用Langendorff法进行大鼠离体心脏灌流，给予4种炮制品的不同浓度的煎煮液，对HR、LVSP、LVEDP、±dp/dtmax进行测定。
　　结果:
　　1.含量测定结果表明，6种主要生物碱总含量及总生物碱含量高压片（简称:GY）＞黑顺片（简称:H）＞高温片（简称:GW）＞微波片（简称:WB）。
　　2.急性毒性试验结果表明，当四种炮制品煎煮液的最大给药剂量为48g生药·kg-1，相当于临床成人日剂量(15g·60kg-1)的192倍，无动物死亡。
　　3.回阳救逆实验表明，与模型组小鼠血浆比较，附子4种炮制品煎煮液组均能使阳虚小鼠血浆ET、c-GMP含量降低，c-AMP/c-GMP、c-AMP含量升高，同时能增加脾脏、胸腺的质量指数，具有显著性差异。在0.75-7.04g/kg浓度范围内剂量与ET、c-GMP、c-AMP、脾脏指数、胸腺指数分别呈良好的线性关系，且各给药组小鼠各种指标均无明显差异。
　　4.附子4种炮制品煎煮液组小鼠与模型组小鼠相比，均能扩大毛细血管管径，增加毛细血管网交叉点数。且在0.75-5.63g/kg浓度范围内，随着剂量的增大，给药组小鼠毛细血管网管径及交叉点数与模型组小鼠相比差异逐渐增大。
　　5.附子4种炮制品煎煮液组在0.75-7.04g/kg的浓度范围内均能使离体大鼠心脏的HR、LVSP的值显著提高，降低LVEDP，增大±dp/dtmax，强心作用明显，且剂量和HR、LVSP、LVEDP、±dp/dtmax呈良好的线性关系，同时附子4种炮制品组对心脏各指标的作用无统计学差异。
　　结论:
　　研究表明，附子3种新型炮制品煎煮液，在急毒实验及回阳救逆、回阳通脉、强心作用方面与传统炮制工艺黑顺片煎煮液的作用无明显差异，说明这3种新型炮制工艺的附子炮制品是安全有效的。同时高压片在回阳救逆方面与黑顺片作用基本相当，但高压片的毒性要小于黑顺片，并且在回阳通脉、强心作用方面也要优于黑顺片。同时高压片的有效生物碱含量要高于黑顺片，说明在其他的某些功效上可能也要优于黑顺片，因此本研究发现高压片要优于黑顺片。所以本研究可以为附子生产中炮制工艺的改进提供重要的参考价值，同时为附子的临床安全使用剂量范围提供参考依据，为后续附子的毒理及药效学方面的研究提供了实验基础。

目录

声明

摘要

引言

第一章 文献综述

1．1 附子炮制工艺的研究

1．1．1 炮制原理的研究

1．1．2 古代炮制工艺的发展

1．1．3 现代炮制工艺的研究进展

1．2 附子毒理学的研究

1．2．1 附子的毒性机理

1．2．2 炮制对附子毒性的影响

1．3 附子药效学的研究

1．3．1 强心作用

1．3．2 正性肌力作用

1．3．3 附子“回阳救逆”模型的研究

1．3．4 附子对血流动力学的影响

1．3．5 抗衰老作用

1．3．6 抗肿瘤作用

1．3．7 抗炎作用

1．3．8 镇痛作用

1．3．9 抗心律失常作用

1．4 总结与展望

第二章 附子不同炮制品及其煎煮液的含量测定

2．1 仪器与试药

2．2 方法与结果

2．2．1 炮制工艺

2．2．2 六种生物碱的含量测定

2．2．3 总生物碱的含量测定

2．2．4 煎煮液的含量测定

2．3 讨论

第三章 附子不同炮制品煎煮液的急性毒性研究

3．1 材料

3．1．1 药材

3．1．2 器材

3．1．3 动物

3．2 方法

3．2．1 附子不同炮制品的制备

3．2．2 附子不同炮制品煎煮液的制备

3．2．3 附子水煎液最大耐受量实验

3．2．4 结果统计

3．3 结果

3．3．1 最大耐受量实验

3．3．2 毒性反应

3．3．3 对小鼠体重和进食量的影响

3．3．4 对小鼠主要脏器系数的影响

3．3．5 组织病理学观察

3．4 讨论

第四章 小鼠阳虚模型的建立及回阳救逆实验研究

4．1 材料

4．1．1 动物

4．1．2 药品与试剂

4．1．3 仪器

4．2 方法

4．2．1 附子不同炮制品煎煮液的制备

4．2．2 对阳虚小鼠环核苷酸系统的影响

4．2．3 结果统计

4．3 实验结果

4．3．1 各组小鼠体重变化趋势图

4．3．2 附子四种炮制品对小鼠胸腺、脾脏质量指数的影响

4．3．3 附子四种炮制品对小鼠血浆环核苷酸系统及内皮素含量的影响

4．4 讨论

第五章 附子不同炮制品煎煮液对阳虚小鼠耳廓微循环的作用研究

5．1 材料

5．1．1 动物

5．1．2 药品与试剂

5．1．3 仪器

5．2 方法

5．2．1 附子不同炮制品煎煮液的制备

5．2．2 附子不同炮制品煎煮液对阳虚小鼠耳廓微循环的影响

5．3 结果

5．3．1 对肾阳虚小鼠一般状态的观察

5．3．2 对肾阳虚小鼠耳廓微循环的影响

5．4 讨论

第六章 附子不同炮制品煎煮液对离体大鼠心脏强心作用的比较

6．1 材料

6．1．1 动物

6．1．2 药品与试剂

6．1．3 仪器

6．2 方法

6．2．1 附子不同炮制品煎煮液的制备

6．2．2 晶体灌注液(K-H液)的配制

6．2．3 离体心脏的制备

6．3 结果

6．3．1 不同炮制工艺的附子炮制品煎煮液的强心作用

6．3．2 四种炮制品煎煮液强心作用的量效关系初探

6．4 讨论

结语

参考文献

附录

在校期间发表论文情况

致谢