基于骨代谢探讨肾阴虚证与肾阳虚证PMOP的差异及两种补肾法的干预机制

摘要

目的:
　　分析绝经后骨质疏松症(Postmenopausal osteoporosis，PMOP)中属于肾阴虚证与肾阳虚证患者临床基本资料、骨密度和骨标志物四项等指标，探讨两种证型患者间的差异。
　　基于Ⅰ型胶原合成、交联与基质矿化探讨补肾阴法与补肾阳法治疗PMOP的疗效及其作用机制的差异。
　　方法:
　　选择于广州中医药大学第一附属医院住院治疗，并诊断为PMOP的患者，根据中医证型诊断标准纳入肾阴虚证与肾阳虚证患者，收集两种证型患者年龄、绝经年龄、绝境年限、体重、身高、BMI等临床资料，并检测患者骨密度(Bone mineraldensity，BMD)、骨矿含量(Bone mineral content，BMC)、T值、Ⅰ型前胶原氨基端延长肽(Procollagen I N-terminal peptide，PINP)、β-Ⅰ型胶原羧基末端肽(β-cross linked C-telopeptide of typeⅠ collagen，β-CTX)、N端骨钙素(N-MID)、25-羟维生素D（25-OH Vitamin D）。采用独立样本t检验比较两种证型患者间各临床资料及相关指标间的差异。
　　150只雌性SD大鼠随机分为五组:模型组、假手术组、西药组、补肾阴组和补肾阳组。建立双侧大鼠卵巢切除模型，三个月后，给予药物灌胃干预。西药组予福善美、补肾阴组予六味地黄丸、补肾阳组予桂附地黄丸、假手术组和模型组予以生理盐水。药物干预三个月后进行指标检测，采用Lunar双能X线骨密度仪检测大鼠股骨近端骨密度，使用骨组织石蜡切片HE染色法观察大鼠股骨近端松质骨的组织形态学，采用Elisa法检测大鼠血清骨代谢标志物骨组织特异性碱性磷酸酶(Bone-specificalkphase，B-ALP)、PINP、NTX和CTX的含量，采用RT-PCR法检测大鼠骨组织中调控Ⅰ型胶原合成(COLIA1、COLIA2)，Ⅰ型胶原交联(Lhx9)和基质矿化(Bglap、Ibsp、Smad3、Runx-2)的相关基因的表达情况。采用单因素方差分析探讨各组间相关指标的差异。
　　成果:
　　共纳入61例汉族PMOP症患者，其中诊断为肾阴虚证者28例，肾阳虚证者33例。肾阴虚证患者与肾阳虚证患者在年龄、绝经年限、体重、身高、BMI方面的差异采用独立样本t检验，结果示两组患者在各项基线资料上的差异无统计学意义(P＞0.05）。以BMI等于25作为分类标准，对患者进行分类，其中肾阴虚组患者BMI大于等于25的数量多于肾阳虚组，两组间差异的比较采用卡方检验，结果示，两组间体重超重人数所占比例的差异具有统计学意义（P＜0.01)。两组间BMD和BMC的比较采用独立样本t检验，统计结果示两组间BMC的差异无统计学意义(P＞0.05)。两组间BMD的差异具有统计学意义(P＜0.05)，说明补肾阴组的BMD明显高于补肾阳组。β-CTX、N-MID、25-OH VitD三项指标在两组间的差异无统计学意义（P＞0.05）。两组间PINP水平的差异具有统计学意义（P＜0.05），说明肾阴虚组的PINP水平明显大于肾阳虚组。
　　大鼠卵巢切除后，模型组骨密度明显低于假手术组（P＜0.05），给予药物（福善美、桂附地黄丸、六位地黄丸）干预后大鼠骨密度明显高于模型组（P＜0.05），西药组骨密度明显高于中药组骨密度（P＜0.05），补肾阳组和补肾阴组间比较差异无统计学意义(P＞0.05)。在各组大鼠股骨近端骨组织形态学比较中，与假手术组相比，模型组骨小梁数量减少，排列不齐，间隙增宽，可见断裂导致的骨性连接缺失。药物（福善美、桂附地黄丸、六位地黄丸）干预后，与模型组相比，骨小梁数量增多，排列整齐，间隙变窄，无可见断裂。与假手术组相比，模型组中基质矿化相关基因Lhx9的表达明显降低(P＜0.05)。药物干预组中，补肾阳组的胶原合成相关基因COLIA1的表达较假手术组明显增高（P＜0.05），西药组和补肾阴组中COLIA2基因的表达较模型组明显增高（P＜0.05)，补肾阳组中Lhx9基因的表达较模型组明显增高（P＜0.05）。与西药组相比，补肾阳组中COLIA1和Lhx9基因的表达明显增加（P＜0.05）。补肾阳组和补肾阴组相比，COLIA1和Lhx9基因的表达明显增高（P＜0.05），COlIA2明显降低（P＜0.05）。与假手术组相比模型组中Bglap和Runx-2基因的表达明显降低（P＜0.05）。药物干预组中，与模型组相比，西药组和补肾阳组Bglap的表达明显增高（P＜0.05），补肾阴组Ibsp的表达明显增高（P＜0.05），三组的Smad3的表达均明显增高（P＜0.05）。与西药组相比，补肾阳组的Smad3基因与补肾阴组的Ibsp基因表达均明显增高（P＜0.05）。和补肾阴组相比，补肾阳组中Bglap基因的表达明显增高（P＜0.05），Ibsp基因的表达明显降低(P＜0.05)。
　　结论:
　　肾阴虚证与肾阳虚证PMOP患者在BMI、BMD及骨标志物PINP等方面存在着明显差异，肥胖及骨形成速率的增加可能是肾阴虚证患者BMD明显高于肾阳虚证患者的可能原因。
　　补肾阴法和补肾阳法可通过提高去势大鼠骨密度、改善骨组织结构的破坏有效治疗大鼠PMOP症。两种补肾法的干预可能是通过调节骨组织代谢并调控Ⅰ型胶原合成、交联与基质矿化相关基因的表达发挥治疗作用。同时，补肾阴法和补肾阳法的具体作用机制存在明显差异。

目录

声明

摘要

引言

第一章 文献研究

第一节 现代医学对PMOP症的研究现状

一、PMOP的概念及流行病学现状

二、PMOP的发病机制

四、PMOP症的治疗

第二节 中医学对PMOP症的认识

一、PMOP的病因病机

二、PMOP的中医辩证分型

三、PMOP的中医治疗

小结

第二章 肾阴虚证与肾阳虚证患者骨代谢相关机制差异分析

第一节 研究背景

第二节 资料和方法

一、临床资料

二、病例选择

三、研究方法

第三节 研究结果

一、一般情况

二、两组间骨密度及骨矿含量的比较

三、两组间骨代谢四项的比较

第四节 讨论

第三章 基于Ⅰ型胶原与基质矿化探讨补肾阴法与补肾阳法治疗PMOP症的分子机制差异

第一节 研究背景

第二节 实验材料

第三节 实验方法

一、动物分组及造模

二、药物干预

三、指标检测

第四节 实验结果

一、大鼠股骨骨密度

二、大鼠股骨近端骨组织形态学比较

三、大鼠血清骨组织代谢物的水平

四、大鼠骨组织RT-PCR

第四节 讨论

结语

参考文献

致谢

附录