补中益气汤预防给药对UC小鼠NLRP3炎性体调控研究

摘要

本文主要从以下几个部分展开论述：
　　第一部分：补中益气汤预防给药对UC小鼠肠道变化的影响
　　目的：
　　UC是以腹痛、腹泻、黏液血便为主要临床表现的溃疡性结肠炎疾病。建立小鼠UC模型，以补中益气汤行预防性给药，观察小鼠全身症状的变化，结肠病理改变，评估补中益气汤对急慢性UC小鼠的预防作用。
　　方法:
　　将240只C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、柳氮磺砒啶(SASP)对照组，补中益气汤高剂量组，补中益气汤中剂量组，补中益气汤低剂量组，每组40只。除正常组外，其余各组予DSS造模7天。空白对照组，模型对照组每日给予蒸馏水0.01mL/g灌胃;柳氮磺砒啶对照组每日给予柳氮磺砒啶1.33g/kg灌胃;补中益气汤高、中、低剂量组每日分别给予补中益气丸12g/kg、6g/kg、3g/kg灌胃，给药周期14天，于1、2、3、4周4个时间点处死部分小鼠（每组10只），提取结肠样本，观察小鼠结肠病理变化。
　　结果:
　　较空白组，各周模型组小鼠结肠缩短(P＜0.05)，结肠质量增加(P＜0.05);较模型组，各周用药组结肠缩短明显缓解(P＜0.05)，结肠质量无明显差异。各周模型组小鼠病理见结肠上皮糜烂，出血，多病灶浅溃疡，大量炎细胞浸润;给药组均不同程度的改善上述症状。
　　第二部分：补中益气汤预防给药对UC小鼠结肠黏膜NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA的影响
　　目的：
　　NLRP3炎性体由NLRP3(NOD样受体3，NOD-like receptor protein3)、ASC（凋亡相关的斑点样蛋白，apoptosis-associated speck-like protein containing CARD)、caspase-1（含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1）构成。NLRP3是危险信号的感受器，能被多种病原体激活，激活后的NLRP3可与ASC、caspase-1连接，形成NLRP3炎性体，从而进一步使caspase-1活化，参与肠道免疫反应。本实验通过观察补中益气汤对UC小鼠行预防干预后小鼠黏膜NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA的影响，并探讨相关机制。
　　方法:
　　造模、分组、给药同前。处死小鼠，提取结肠样本。采用实时荧光定量-聚合酶链式反应(real-time Quantitative polymerase chain reaction，qPCR)检测小鼠结肠黏膜NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA表达水平。
　　结果:
　　造模1、2周时，较空白组，模型组NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA表达水平显著升高(P＜0.05);较模型组，柳氮磺砒啶对照组NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA表达水平显著下降(P＜0.05);补中益气汤高、中、低剂量组NLRP3的mRNA表达水平无明显差异，ASC、caspase-1的mRNA表达水平显著下降(P＜0.05)。造模3、4周时，较空白对照组，模型对照组NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA表达水平显著升高(P＜0.05);较模型对照组，柳氮磺砒啶对照组、补中益气汤高、中、低剂量组NLRP3的mRNA表达水平下降(P＜0.05)，ASC、caspase-1的mRNA表达水平显著升高（P＜0.05）。
　　第三部分：补中益气汤预防给药对UC小鼠结肠黏膜及血浆细胞因子IL-1β、IL-18、IL-33的作用
　　目的：
　　活化后的NLRP3炎性体可激活caspase-1，使其分泌加工IL-1β、IL-18、IL-33等细胞因子。IL-1β、IL-18、IL-33是重要的炎症介质，在溃疡性结肠炎的发生发展过程中起重要作用。
　　方法:
　　造模、分组、给药同前。提取小鼠血浆样本及结肠黏膜样本。采用酶联免疫吸附测定法检测小鼠血浆及结肠黏膜中IL-1β、IL-18、IL-33的含量。
　　结果:
　　与空白对照组比较，各周模型对照组小鼠血浆、结肠黏膜中IL-1β、IL-18、IL-33的含量显著升高(P＜0.05);造模1周时，与模型组比较，柳氮磺砒啶对照组、补中益气汤高、中、低剂量组小鼠血浆、结肠黏膜IL-1β、IL-18、IL-33的含量显著降低(P＜0.05);造模2周时，与模型对照组比较，柳氮磺砒啶对照组、补中益气汤高、中、低剂量组小鼠血浆、结肠黏膜IL-1β、IL-18含量显著降低(P＜0.05)，IL-33的含量无明显差异(P＞0.05);造模3、4周时，与模型对照组比较，柳氮磺砒啶对照组、补中益气汤高、中、低剂量组小鼠血浆、结肠黏膜IL-1β、IL-18、IL-33的含量无明显差异(P＞0.05)。
　　结论:研究结果显示，葡聚糖硫酸钠可成功诱导小鼠急慢性溃疡性结肠炎，模型对照组在溃疡性结肠炎急性、慢性期均显示出与人类溃疡性结肠炎相似的症状，其炎症的发展可能与小鼠结肠黏膜NLRP3炎性体被激活，小鼠结肠黏膜NLRP3、ASC、caspase-1的mRNA表达上调，以及其下游炎症因子IL-1β、IL-18、IL-33的表达上调相关。本研究以柳氮磺砒啶、补中益气汤高、中、低三个剂量对葡聚糖硫酸钠诱导小鼠溃疡性结肠炎行预防给药，小鼠肠道形态及病理结果显示小鼠溃疡性结肠炎肠道症状缓解。提示补中益气汤在预防溃疡性结肠炎上有一定的作用。在溃疡性结肠炎急性期，补中益气汤通过下调肠黏膜NLRP3炎性体各组分及抑制IL-1β、IL-、IL-33表达，从而预防急性溃疡性结肠炎;在溃疡性结肠炎缓解期，补中益气汤通过上调NLRP3炎性体各组分从而防止慢性溃疡性结肠炎的发生发展。

目录

声明

摘要

引言

第一章 文献研究

第一节 现代医学对UC的研究进展

一、UC的发病因素

二、现代医学对UC的治疗方法

第二节 传统医学对溃疡性结肠炎的研究进展

一、传统医学对uc病因病机的认识

二、传统医学对UC的治疗方法

三、补中益气汤的临床研究

第三节 NLRP3炎性体的研究进展

一、NLRP3炎性体的构成及激活途径

二、NLRP3炎性体相关性细胞因子研究

三、NLRP3炎性体与IBD

第四节 UC动物模型建立的相关研究

一、化学刺激法

二、免疫法

三、复合法

第五节 小结与展望

第六节 课题研究思路

第二章 实验研究

实验一 补中益气汤对UC小鼠结肠长度、质量及病理学形态的影响

实验二 补中益气汤对UC小鼠结肠黏膜中NLRP3、ASG、caspase-1 mRNA表达影响

实验三 补中益气汤对UC小鼠血浆及结肠黏膜细胞因子IL-1β、IL-18、IL-33的影响

结语

参考文献

附录

在校期间发表论文情况

致谢