消瘀散结抑癌灌肠剂对裸鼠前列腺癌组织PTEN基因的调控

摘要

目的:
　　前列腺癌(prostate cancer，PCa)是老年男性泌尿生殖系统常见的恶性肿瘤，其在我国发病率正节节攀升。在我国大部分前列腺癌患者得到确诊时已达肿瘤中晚期，无法进行根治手术切除肿瘤病灶，只能采用内分泌治疗，但是经过约1～2年的中位期，不可避免地都将发展为去势抵抗性前列腺癌(Castrate-resistant ProstateCancer，CRPC)。目前国内外对于CRPC仍没有一个标准有效的治疗方案，而中医药在治疗CRPC方面得到了一定的肯定。
　　本研究以人前列腺癌裸鼠移植瘤模型为对象，观察消瘀散结抑癌灌肠剂对人前列腺癌裸鼠皮下移植瘤的抑制作用，以及它对前列腺癌组织中PTEN基因表达的影响，从而初步探讨消瘀散结抑癌灌肠剂抗肿瘤的作用机制，为中药复方抗肿瘤的应用奠定基础。
　　方法:
　　通过体外培养人前列腺癌PC-3细胞，使用皮下接种法将PC-3细胞悬液对裸鼠进行造模，接种部位为裸鼠右上肢颈背部，成功建立人前列腺癌移植瘤模型。将30只荷瘤裸鼠随机分为2组，治疗组给予消瘀散结抑癌灌肠剂，对照组给予等剂量生理盐水，每组15只。造模10天后开始用药物干预，给药途径为灌肠，隔天一次，持续30天。治疗期间定期测量肿瘤大小，裸鼠体重，观察裸鼠全身状况。实验结束时，将移植瘤完整取出，测量肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线，计算抑瘤率。运用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测PTEN基因mRNA的表达，Western Blot印迹法检测PTEN基因的蛋白表达。
　　结果:
　　1.治疗组裸鼠肿瘤体积小于对照组，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05），治疗组对瘤体积的生长抑制率为21.8％。
　　2.RT-qPCR检测结果提示，治疗组肿瘤组织中PTEN mRNA的相对表达量较对照组升高，与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.001）。Western blot检测PTEN蛋白在治疗组和对照组中表达量分别为(0.55±0.13、0.32±0.09)，两组相比差异有统计学意义(P＜0.001)。
　　结论:
　　1.消瘀散结抑癌灌肠剂可以抑制人前列腺癌裸鼠移植瘤的增长。
　　2.消瘀散结抑癌灌肠剂对前列腺癌起效的分子机制可能与上调PTEN基因表达及蛋白翻译有关，从而抑制前列腺癌细胞增殖和转移。

目录

声明

摘要

引言

第一章 文献研究

1．1 前列腺癌现代医学研究进展

1．1．1 前列腺癌流行病学

1．1．2 前列腺癌临床诊断

1．1．3 前列腺癌治疗

1．2 前列腺癌中医药研究进展

1．2．1 中医病因病机

1．2．2 中医辩证论治

1．2．3 现代中药药理研究

1．3 前列腺癌与PTEN基因研究进展

1．3．1 PTEN基因的分子结构与功能

1．3．2 PTEN基因的抑癌机制

1．3．3 PTEN表达缺陷与肿瘤分期

第二章 实验研究

2．1．实验材料

2．1．1 实验动物及细胞

2．1．2 主要试剂与溶液配置

2．1．3 主要仪器和耗材

2．2 实验方法

2．2．1 前列腺癌移植瘤裸鼠模型建立

2．2．2．消瘀散结抑癌灌肠剂对裸鼠前列腺癌移植瘤模型的体内抑瘤作用

2．2．3 实时荧光定量PCR检测PTEN mRNA的表达

2．2．4 Western blot免疫印迹测定PTEN基因的蛋白表达

2．3 统计学方法

2．4 实验结果

2．4．1 荷瘤裸鼠的制备

2．4．2 消瘀散结抑癌灌肠剂对裸鼠前列腺癌移植瘤模型的体内抑瘤作用

2．4．3 实时荧光定量PCR检测PTEN mRNA的表达结果

2．4．4 Western blot测定PTEN基因的蛋白表达结果

2．5 讨论

2．5．1 细胞培养及前列腺癌裸鼠模型建立

2．5．2 消瘀散结抑癌灌肠剂的体内抑瘤作用

2．5．3 消瘀散结抑癌灌肠剂抑瘤机制研究

结论

参考文献

附录

在校期间发表论文情况

致谢