雌激素对人胚髁突软骨细胞增殖与分化的影响

摘要

目的:①初步查明雌激素受体、Ⅱ型胶原在人胚髁突软骨中的分布情况;②探求最佳的人胚髁突软骨细胞体外分离培养方法,以期获得高活性的软骨细胞为后续实验提供载体工具。③观察雌激素对髁突软骨细胞增殖与分化的影响。
　　 方法:①采用HE染色、免疫组织化学染色法检测雌激素受体α、β及Ⅱ型胶原在人胚髁突软骨各层的表达情况。②采用机械分离及改良两步酶消化法体外培养髁突软骨细胞,甲苯胺蓝及Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色法鉴定软骨细胞,并观察其形态学结构,描绘生长曲线,以建立人胚髁突软骨细胞体外培养体系,为实验提供应用细胞。③MTT法检测不同浓度雌激素(10-6mol/L、10-8mol/L、10-10mol/L、10-12mol/L、0mol/L)对体外分离培养的人胚髁突软骨细胞增殖与分化的影响。
　　 结果:①雌激素受体Erα、Erβ在人胚颞下颌关节髁突软骨的纤维层及增殖层几乎未见表达;Erα主要表达于髁突软骨的过渡层、肥大层,钙化软骨层中有少量表达;Erβ集中表达于肥大层,钙化软骨层中表达较少;Erα、Erβ在细胞质、细胞核内均有表达,Erα在细胞内分布均匀,而Erβ集中表达于细胞核内。②Ⅱ型胶原主要表达于髁突软骨的过渡层及肥大层,而纤维层、增殖层未见表达,钙化软骨层中有少量表达。③软骨细胞体外培养早期(1～3代)以三角形、多角形为主,细胞核呈圆形、椭圆形,可见1～2个核仁,大小均一;细胞呈铺路石样生长:培养至第4代后梭形细胞增多,伪足较长,开始呈漩涡状生长。甲苯胺蓝染色阳性,Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色阳性,证明培养的细胞为软骨细胞。④高浓度(10-6mol/L)、低浓度(10-12mol/L)雌二醇抑制软骨细胞增殖,生理浓度(10-10mol/L～10-8mol/L)雌二醇促进软骨细胞增殖,且随着作用时间的延长,促进或抑制作用增强。
　　 结论:①Erα、Erβ以及Ⅱ型胶原在人胚髁突软骨呈差异性表达。②机械分离及两步酶消化法可获取均一、高增殖活性的髁突软骨细胞。③雌激素对髁突软骨细胞增殖分化具有双向调节作用,并呈时间和剂量依赖性。