藏药君扎抗单胺氧化酶活性成分及钩藤内生菌GT-7次级代谢产物的研究

摘要

本论文对藏药君扎（基源植物为掌叶大黄（Rheum palmatum））进行抗单胺氧化酶活性成分跟踪分离及药用植物钩藤中的一株内生真菌GT-7的次级代谢产物进行分离研究。运用多种现代色谱(高效液相色谱，柱色谱法，制备薄层色谱法，凝胶色谱等)分离技术，并借助1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS和2D-NMR等波谱方法分离、鉴定了21个化合物。其中从藏药君扎总有机酸提取物中跟踪分离得到11个酚类化合物，对分得的化合物进行了抗乙酰胆碱酯酶(AChE)和单胺氧化酶(MAO)活性评价，并且用分子对接试验研究了代表性化合物2、4、8与单胺氧化酶的结合模式。从钩藤（Uncaria rhynchophylla）内生菌 GT-7中分离到10个化合物，其中4个为新化合物，对它们进行了抗单胺氧化酶和乙酰胆碱酯酶活性的评价，并运用分子生物学手段鉴定内生真菌GT-7的属，研究结果如下：
　　1.藏药君扎中分离得到并鉴定的化合物为：白皮杉醇(1)，白藜芦醇(2)，云杉新苷(3)，丹叶大黄素(4)，白皮杉醇-3'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)，土大黄苷(6)，儿茶酸(7)，脱氧丹叶大黄素(8)，没食子酸(9)，大黄酸(10)，2-羟基-14-二十二烯酸(11)。采用酶标法测定了其抗乙酰胆碱酯酶活性和单胺氧化酶活性，并且进行了化合物2、4、8对单胺氧化A(MAO-A)和单胺氧化酶B(MAO-B)的分子对接研究。研究表明：化合物1、8、9有强的抗单胺氧化酶活性，IC50值为16.4±1.5,11.5±.1.1,10.2±1.5μM，化合物2、3、4、5、6有中等的抗单胺氧化酶活性IC50值为88.2±3.2，85.0±3.8，38.1±2.1，47.3±3.2，70.4±3.8μM；化合物7有弱的抗单胺氧化酶活性IC50值为140.5±5.4μM；化合物10和11没有活性。化合物4、6、8具有对MAO-B的选择性，选择性值（[MAO-B]IC50/[MAO-A]IC50）为4.74，10.01，9.42。以上化合物对乙酰胆碱酯酶无活性。单胺氧化酶分子对接结果表明：化合物8与MAO-A，MAO-B均结合最好，活性最强；化合物4中B环上甲氧基邻位有-OH取代是会导致配体与活性口袋的结合作用减弱，活性下降；化合物2与化合物4、8相比在活性口袋中发生了180度的掉转，活性降低较大。
　　2.从钩藤内生菌GT-7中分离并鉴定了10个化合物，其中6个为已知化合物：2-异丙基-5-甲基-2,4-环己二烯-1-醇(12)，顺-4-羟基蜂蜜曲菌素(13)，蜂蜜曲菌素甲醚(14)，常春藤酮酸(15)，蜂蜜曲菌素(16),吐叶醇(17)。新化合物小丛壳内酰胺A(18)、小丛壳内酰胺B(19)、小丛壳内酰胺C(20)、小丛壳内酰胺D(21)。用酶标法对分离得到的化合物进行抗单胺氧化酶与乙酰胆碱酯酶活性评价。研究表明：蜂蜜曲菌素(16)具有中等强度的抗单胺氧化酶活性，其IC50值为50.93±0.34μM，蜂蜜曲菌素甲醚(14)具有弱的抗单胺氧化酶活性其IC50值为301.0±4.1μM。小丛壳内酰胺D(21)有中等强度的抗乙酰胆碱酯酶的活性，IC50值为73.7±6.4μM。
　　3.运用分子生物学手段，对菌株GT-7的rDNA的ITS序列区核酸进行序列分析，并在Blast上与其同源度较高的ITS rDNA序列进行比对，通过聚类分析，鉴定内生真菌GT-7菌株为小丛壳属（Glomerella）真菌。

目录

封面

声明

目录

中文摘要

英文摘要

第1章 绪论

1.1大黄属植物化学成分及药理活性研究概况

1.2单胺氧化酶抑制剂研究概况

1.3乙酰胆碱酯酶抑制剂研究概况

1.4 钩藤内生真菌研究现状

第2章 藏药君扎抗单胺氧化酶活性成分研究

2.1引言

2.2材料与仪器

2.3实验方法

2.4结果与讨论

2.5小结

第3章 钩藤内生真菌GT-7次级代谢产物的研究

3.1引言

3.2材料与仪器

3.3实验方法

3.4 结果与讨论

3.5 小结

第4章 菌株GT-7的分子生物学鉴定

4.1 实验材料

4.2 实验方法

4.3 结果与分析

结论

参考文献

致谢

附录A（攻读硕士学位期间所发表的论文及成果）

附录B（化合物18-21图谱）