两种荧光定量PCR法检测乳腺癌组织中miR-21的应用分析

摘要

目的：应用SYBR Green I荧光染料法和TaqMan荧光探针法检测乳腺癌组织中miR-21，通过两种方法的比较，选择精确度高，成本相对较低，更加适用于临床的miRNA检测方法。
　　 方法：收集2010年度遵医附院普外科收治的14位乳腺癌患者的乳腺癌及癌旁组织作为材料共14组，提取总RNA，设计miR-21特异性引物和U6引物反转录成单链cDNA，再分别用SYBR Green I染料和TaqMan荧光探针作为指示剂，实时荧光定量PCR检测miR-21在乳腺癌及癌旁组织中的相对表达水平。应用统计学分析SYBR Green I染料法与TaqMan探针法检测结果间的差异，最后用Northern Blot法进行实验验证。
　　 结果：提取的总RNA经1％琼脂糖电泳显示明显的28s和18s rRNA两条带，且OD260/OD280的比值都介于1.8-2.0之间，提示所得RNA质量较高；熔解曲线显示U6及miR-21的熔解曲线单一，表明其特异性好。U6及miR-21的扩增曲线符合PCR扩增规律，结果可靠。经统计学分析，SYBR Green I染料法检测癌组织与癌旁组中的miR-21，经配对t检验显示组间结果有显著性差异(t=6.704 P<0.001)；Taqman探针法组间比较，表达有显著性差异(t=7.238 P<0.001)；两种定量PCR方法检测乳腺组织中miR-21表达，经方差分析两种方法的结果间数据无显著性差异(P>0.05)。Northern Blot实验结果与上述结果接近，证明其结果可靠。
　　 结论：1.在扩增产物特异的条件下，应用SYBR Green I染料法检测miRNA的灵敏度和特异性与TaqMan探针法相近，结果间无显著性差异。由于SYBR Green I染料法是一种简单、有效、实用，应用范围广，成本相对较低，是更加适用于临床的miRNA检测方法。
　　 2.miR-21在乳腺癌组织中表达上调，与癌旁组织比较，有显著性差异(P<0.05)。说明miR-21表达上调与乳腺癌有一定的相关性。