负载RPL8蛋白的DC疫苗抑制乳腺癌生长的实验研究

摘要

目的:
　　 制备负载RPL8蛋白的DC疫苗，观察DC疫苗对小鼠乳腺癌的疗效，并探讨其抑制乳腺癌生长的作用机制。
　　 方法:
　　 1.根据Gene Bank提供的RPL8的mRNA序列设计引物，PCR扩增RPL8基因，与载体酶切、连接，构建pET28a(+)-RPL8重组质粒。
　　 2.构建好的重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中，接种到含Kan的LB培养液中，37℃震荡培养4h，加入IPTG至终浓度1mmol/l，30℃，80rpm，震荡摇6h，并取菌液进行SDS-PAGE和Western Blot。
　　 3.制备好的RPL8蛋白冲击DC，荧光显微镜下观察DC负载RPL8蛋白情况。
　　 4.负载RPL8蛋白的DC培养48h与尼龙毛柱子分离的小鼠脾脏T淋巴细胞按不同的比例混合，继续培养72h，分别以不同效靶比加入到4T1细胞中培养48h，酶标仪测定其OD值。
　　 5.将负载RPL8蛋白的DC疫苗注射入荷瘤小鼠体内，观察乳腺癌肿瘤体积变化及小鼠的生存时间与瘤体的组织病理变化。
　　 结果:
　　 1.经酶切及测序鉴定，重组质粒含有大约6124bp的片段，序列与gene bank一致，成功构建了携带RPL8基因的重组质粒。
　　 2.含有重组质粒的大肠杆菌BL21经诱导后表达约28KD的蛋白，经SDS-PAGE和Western blot鉴定，获得目的蛋白。
　　 3.RPL8蛋白与DC混合培养后，经荧光显微镜观察，可见细胞内有荧光颗粒。
　　 4.负载RPL8蛋白的DC疫苗体外杀伤4T1乳腺癌细胞的细胞毒活性与未负载RPL8蛋白的DC及PBS组比较，差异有显著性(p＜0.05)。
　　 5.负载RPL8蛋白的DC疫苗，注入荷瘤小鼠体内后，治疗组的小鼠生存期和小鼠的肿瘤体积变化较对照组有显著性差异(p＜0.05)。
　　 结论:
　　 负载RPL8蛋白的DC疫苗对小鼠乳腺癌具有免疫治疗作用，为乳腺癌的免疫治疗提供理论依据。

目录

声明

中英文缩略词表

摘要

前言

第一部分：RPL8蛋白的制备与鉴定

引言

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

第二部分 DC疫苗的制备以及抗肿瘤活性的研究

引言

1．实验材料

2 方法

3 结果

4 讨论

结论

参考文献

综述

致谢

作者简介