Duchenne型肌营养不良的遗传学、血清生化学及病理学的探讨

摘要

目的:观察杜氏型肌营养不良(DMD)基因突变分布情况，了解儿童DMD基因突变特点。探讨DMD患儿血清肌酸激酶(CK)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)的变化规律及CK与AST、ALT之间的相关性。分析DMD肌肉病理改变，及其与年龄的关系。
　　 方法:收集DMD的男性患儿。采用多重连接依赖性探针扩增技术(MLPA)检测患儿DMD基因的突变情况。采用酶联免疫荧光法和速率法分别测定不同年龄段患儿的血清CK和ALT、AST活性。冰冻切片，肌肉标本经常规组织化学染色及免疫组织化学染色，观察DMD患儿肌肉病理改变及抗肌萎缩蛋白表达情况。
　　 结果:共收集DMD患儿177名。(1)进行DMD基因检测的患儿共163例。MLPA法检测DMD外显子缺失71.17％(116/163)，外显子重复10.43％(17/163)，外显子未见异常18.40％(30/163)。30例外显子未见异常的患儿中，有10名患儿运用第2代高通量测序技术进行了DMD基因测序，均发现DMD基因点突变。存在2个缺失“热区”:主缺失热区位于第45～53外显子，占缺失总数的34.30％;次缺失热区位于第5～19外显子，占缺失总数的26.23％。缺失片段以第49～52外显子最多，单个外显子缺失主要分布在第45外显子。重复突变主要位于DMD基因的N端和棒状区。(2)进行血清酶学检测的患儿共165例，共采血318次。婴儿期DMD患儿的CK、AST、ALT活性即明显升高，分别达到正常值的10、7、5倍以上，并均维持至8岁，以后随着年龄的增长逐渐回落。血清CK分别与AST（r=0.817，p＜0.01）、ALT(r=0.669，p＜0.01)呈正相关。(3)进行肌肉活检的患儿共124例。DMD临床表现进行性加重，婴幼儿期已存在病理变化，主要表现为肌纤维的萎缩及肥大，可见肌纤维变性及坏死、炎细胞浸润;病程后期主要病理改变为少数肌纤维残存，脂肪结缔组织增生，年龄越大病变越严重。Dys-C、Dys-N、Dys-R免疫组织化学染色均为0～1级表达，与患儿年龄及临床症状严重程度无特定关系。
　　 结论:(1)DMD以基因缺失突变为主，突变位点非均匀分布于整个基因，存在突变热区。(2)DMD患儿血清CK、AST、ALT活性反映DMD的发生、发展过程，血清AST、ALT与CK之间有显著相关性，可为早期诊断、减少误诊提供重要依据。(3)DMD患者临床病情和病理改变的严重程度主要与病程和活检年龄相关，与是否保留少数dystrophin蛋白阳性纤维无明显相关。(4)突变基因位点及长度与DMD临床症状之间无明显相关关系

目录

声明

英文缩略词表

摘要

前言

1 材料与方法

1．1 研究对象

1．2 主要实验试剂

1．3 主要实验设备

1．4 实验方法

2 结果

2．1 基因检测结果

2．2 血清生化学检测结果

2．3 肌肉病理学常规及特殊组织化学染色结果

2．4 肌肉病理学免疫组织化学染色结果

2．5 基因改变与dystrophin蛋白表达的关系

2．6 基因改变与表型的关系

3 讨论

3．1 DMD基因学改变

3．2 DMD血清学改变

3．3 DMD病理学改变

4 结论

参考文献

综述 杜氏肌营养不良的研究进展

致谢

作者简介