千里光抗菌性状相关EST-SSRs的开发与杂交种鉴定

摘要

目的:
　　 (1)筛选用于标记千里光抗菌性状相关的EST-SSRs引物序列信息并明确其反应参数;
　　 (2)建立有效的千里光人工杂交方法;
　　 (3)探讨可用于千里光杂交种鉴定的分子生物学指标。
　　 方法:
　　 (1)根据NCBI数据库中菊科植物ESTs(Expressed sequence tags，ESTs)序列的序列信息，通过SSRIT软件获取EST-SSRs分子标记信息，基于Primer5.0软件根据EST-SSRs标记两端的保守序列设计引物;以抗菌性状具有显著差异的千里光SC-32（强抗菌）和SC-35（弱抗菌）为参试材料，CTAB法提取其基因组DNA，通过PCR对其进行扩增，利用非变性聚丙烯酰胺凝胶筛选具有多态性的EST-SSRs引物并明确其反应参数;
　　 (2)以抗菌性状具有显著差异的千里光（SC-32和SC-35）为亲本，参照秋菊杂交育种方法并结合千里光的开花特性建立千里光人工杂交方法，通过套袋、人工授粉，获得杂种F1代;
　　 (3)利用上述EST-SSRs的序列信息和反应参数，对千里光杂交种进行分子生物学鉴定。
　　 结果:
　　 (1)从ESTs数据库中下载的菊科植物ESTs序列一共有13816条，从中发掘出分布于974条ESTs序列中的1048个SSRs位点，SSRs发生频率为7.05％，平均分布距离为1.86 kb;EST-SSRs标记的优势重复类型为四核苷酸重复序列，占EST-SSRs标记总数的40.08％，其中(AAAG)n重复次数最多;利用primer5.0软件设计出的210对引物中，筛选出52对带型稳定、具有多态性的引物，占总引物的24.76％;52对多态性引物共检出206个等位变异，平均每对引物扩增出3.96个等位变异;
　　 (2)建立了千里光人工杂交的方法，得到大量杂交种;52对引物扩增杂交种的带型大致可分为“母本型”、“父本型”、“双亲互补型”和“其他型”四种类型，其中引物ZY681表现为“双亲互补带型”，可以直接用于杂交种的鉴定。
　　 结论:
　　 (1)菊科植物ESTs序列信息可以作为筛选千里光抗菌性状相关EST-SSRs分子标记的数据基础，其中，52对EST-SSRs引物可用于有效标记千里光的抗菌性状;
　　 (2)本研究建立了千里光杂交种的方法;利用EST-SSRs分子标记鉴定千里光杂交种是有效的分子生物学手段。

目录

声明

英文缩略词表

摘要

第一部分 千里光抗菌性状相关EST-SSRs的开发

前言

1 材料与方法

2 实验方法与步骤

3 结果

4 讨论

5 结论

第二部分 利用EST-SSRs鉴定千里光杂交种

前言

1 材料与方法

2 实验方法与步骤

3 结果

4 讨论

5 结论

参考文献

综述

致谢

作者简介