rhBMP-2、PRF和自体骨分别复合珊瑚羟基磷灰石修复骨缺损的实验研究

摘要

目的:通过在比格犬胫骨干骺端建立骨缺损动物模型,同期在骨缺损区分别植入重组人骨形成蛋白-2(rhBMP-2)与珊瑚羟基磷灰石(CHA)的复合物、富血小板纤维蛋白(PRF)与珊瑚羟基磷灰石的复合物、自体骨与珊瑚羟基磷灰石的复合物及单纯珊瑚羟基磷灰石(对照),比较这四种骨移植材料在骨缺损中的成骨效能,为它们的临床应用提供理论依据和操作指导。
　　方法:选用6只比格犬,在其双侧胫骨干骺端分别制造四个相同的直径为6mm、深为5mm的骨缺损;四个骨缺损随机分为A、B、C、D组,同期在4组骨缺损中分别植入rhBMP-2/CHA、PRF/CHA、自体骨/CHA、CHA;术后第2、4、8、12周于比格犬颈部皮下分别注射盐酸四环素,钙黄绿素,茜素红,二甲酚橙行荧光标志;12周后处死6只比格犬,取材;行大体标本观察,比较四组植骨区骨生长情况;拍牙科 CT,观察比较四组植骨区新生骨骨密度情况;制作脱钙石蜡切片,HE染色,光学显微镜下观察各植骨区新生骨的组织学特点,测量、比较12周后四组植骨区新骨的形成量;制作不脱钙硬组织磨片,荧光显微镜下观察各植骨区荧光标记情况,测量、比较各植骨区在不同时段的荧光标记率,即新骨形成量,测量不同荧光带间的垂直距离,计算、比较不同时段四组植骨区新骨的平均矿化沉积速率。
　　结果:1.6只比格犬术后均无死亡,术区无感染,饮食、活动正常;12周后,大体标本见四组植骨区无明显差异,骨生长良好,骨缺损间隙均完全关闭,植骨区与宿主骨边界尚清晰。
　　2.X线示:四组植骨区未见明显成骨不良的透射阴影,新生骨与天然骨连接紧密,各组密度影不全相同,自体骨/CHA组和PRF/CHA组骨密度较致密,rhBMP-2/CHA组致密性低于前两者,CHA组未见明显骨致密影。
　　3.脱钙石蜡切片HE染色后组织学观测:术后12周,四组植骨区未见明显组织坏死和炎症细胞浸润,均有不同程度的新生骨组织及未降解的骨粉;新生骨与宿主骨连接紧密,未见明显界限;新生骨小梁不规则,粗细不一,排列无序;与CHA组相比,其他三组植骨区新生骨小梁更密集、粗大,连续性更好;12周后,四组植骨区成骨量比较:自体骨/CHA组>PRF/CHA组>rhBMP-2/CHA组>CHA组。
　　4.硬组织磨片观察:四组植骨区均可见橙黄色荧光带,即术后2周内均有新骨形成,四组植骨区在术后2周内新骨形成量比较:自体骨/CHA组> PRF/CHA组≈rhBMP-2/CHA组>CHA组;各植骨区均可见绿色荧光带,且均比自身的橙黄色荧光带要多,即术后2~4周四组骨移植材料的成骨能力提高了,四组植骨区在2~4周时新骨形成量比较:自体骨/CHA组>PRF/CHA组≈rhBMP-2/CHA组>CHA组;各植骨区均可见红色荧光带,即各组新生骨量随时间延长不断增加,四组植骨区在4~8周时新骨形成量比较:PRF/CHA组>自体骨/CHA组>PRF/CHA组>CHA组。四组植骨区在术后2~4周新骨的平均矿化速率比较:自体骨/CHA组>PRF/CHA组≈rhBMP-2/CHA组>CHA组;四组植骨区在术后4~8周新骨的平均矿化速率比较:PRF/CHA组>自体骨/CHA组>rhBMP-2/CHA组>CHA组。
　　结论:1.四组植骨区术后2周内均有新骨形成,且随着时间的延长,新生骨量增多。
　　2.三种复合型材料的成骨效应均明显优于单独使用珊瑚羟基磷灰石。
　　3.三种复合型材料中自体骨/CHA组的成骨效应最好,其次为PRF/CHA组,rhBMP-2/CHA组最差。
　　4.自体骨/CHA组在植入后前4周成骨效应最好,之后逐渐下降。
　　5.PRF/CHA组在8周后仍有较强的成骨能力。
　　6.rhBMP-2/CHA组在4周后成骨能力明显下降。

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前言

1 材料

1.1 实验材料

1.2 实验器材及设备

1.3 实验药物试剂

2 方法

2.1 动物模型的建立

2.2 术后观察生活状态及荧光标志

2.3 标本的制取、固定

2.4 组织切片的制作及分析

2.5 统计分析

3 结果

3.1 大体观察

3.2 X线观察

3.3 骨组织切片观察

4 讨论

4.1 动物及骨缺损模型的选择

4.2 研究结果分析

4.3 四色荧光标记的意义

4.4 rhBMP-2载体的选择

4.5 诱导骨组织的过程

5 结论

参考文献

综述口腔种植中植骨材料的研究进展

参考文献

致谢

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