儿童新甲型(H1N1)流感疫苗接种后远期抗体及Th1/Th2细胞因子分泌的研究

摘要

目的:检测儿童接种新甲型H1N1流感疫苗后远期血清抗体水平,评价其体液免疫持久性;检测儿童新甲流疫苗接种后疫苗再刺激T细胞亚群分泌细胞因子情况,探讨疫苗接种后远期T细胞免疫记忆;为新甲流疫苗免疫策略提供理论依据。
　　方法:
　　(1)选择2009年12月~2010年1月新甲型H1N1流感疫苗接种儿童的健康志愿者31名,每名志愿者抽取5ml外周血;其中2ml待自然凝后离心分离血清,用ELISA法检测H1N1流感抗体;
　　(2)取3ml外周血分离淋巴细胞,用10％FBS-RPMI-1640液调整细胞数为1×106个/ml,设新甲型H1N1流感疫苗组(实验组)与正常细胞组(对照组),置5%CO2培养箱,37℃,培养50小时,取上清液检测细胞因子;
　　结果:
　　(1)用ELISA法检测血清中抗体水平:依据公司提供的人血清H1N1-Ab浓度正常范围,31例接种疫苗儿童4年后的抗体阳性率16.13%,抗体浓度均值为70.41ng/L,同时极大值和极小值分别为282.91 ng/L和7.73ng/L,极差达275.18 ng/L,表明抗体水平总体差异大,标准差79.85ng/L,由此对样本H1N1-Ab数据进行Wilcoxon符号秩和检验,P>0.05,尚不能认为研究对象血清H1N1-Ab水平高于正常人。
　　(2)用流式 CBA法检测淋巴细胞培养后上清中 TNF-α水平,对照组中位数90.41pg/ml明显高于实验组的6.54pg/ml。样本数据采用kolmogorov-smirnov检验,发现数据资料非正态分布,P<0.05,采用Wilcoxon符号秩和检验,实验组和对照组秩均值分别为16.24和12.50,结果差异具有统计学意义,P<0.05。
　　(3)用流式CBA方法检测31例标本细胞培养后上清中IL-10水平,实验组明显低于对照组,中位数分别为199.82pg/mL、1704.56pg/mL。两组结果经过 Wilcoxon符号秩和检验,差异具有显著统计学意义,P﹤0.05。
　　(4)接种疫苗儿童细胞培养后16份(奇数号)细胞培养液,用ELISA法检测IFN-γ、TNF-α水平:结果实验组和对照组标本 IFN-γ均值分别为176.22 pg/mL、185.71pg/mL;TNF-α均值分别为152.29 pg/mL、173.34 pg/mL;差异均无统计学意义,P>0.05。
　　(5)接种疫苗儿童细胞经过培养后16份(奇数号)细胞培养液,用 ELISA法检测IL-4、IL-10水平,结果实验组和对照组的 IL-4均值分别为224.03pg/mL、225.95pg/mL; IL-10均值分别为180.68 pg/mL、405.31 pg/mL,差异具有统计学意义,P<0.05。
　　结论:
　　(1)31例儿童接种新甲流疫苗4年后的抗体水平阳性率16.13%,抗体浓度均值为70.41ng/L,儿童接种新甲流疫苗4年后特异性体液免疫不强。
　　(2)31例儿童接种新甲流疫苗4年后的Th1/Th2细胞因子检测正常细胞具有良好分泌功能,而实验组细胞因子水平低于对照组,表明疫苗特异性免疫记忆功能不强,远期免疫记忆效果欠佳。

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前言

1 材料与方法

1.1 主要实验材料

1.2 主要实验试剂

1.3 实验方法

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 ELISA法检测血清H1N1-Ab水平

2.2 流式CBA法检测细胞培养液Th1细胞因子TNF-α水平

2.3 流式CBA法检测淋巴细胞培养液Th2细胞因子IL-10水平

2.4 ELISA法检测Th1细胞因子IFN-γ、TNF-α水平

2.5 ELISA法检测Th2细胞因子IL-4、IL-10水平

2.6 流式CBA法与ELISA法检测IL-10 的相关性分析

3 讨论

3.1 儿童接种新甲流疫苗后远期抗体水平

3.2 免疫记忆与Th1/Th2细胞分化

3.3 疫苗活化后Th1/Th2分泌细胞因子

4 结论

参考文献

综述

致谢

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