CD40L诱导成人急性淋巴细胞白血病源性树突细胞及其功能研究

摘要

目的:肿瘤特异性抗原(TSA)缺失或低表达是肿瘤细胞逃逸免疫监控的主要原因。树突状细胞(DC)是已知人体内功能最强的抗原提呈细胞(APC)，如何以及哪种抗原对DC进行负载从而有效激活特异性的CTL效应一直是影响DC临床应用的核心问题，通过合理的细胞因子诱导成人急性淋巴细胞性白血病(aALL)细胞自身分化为DC是一种全新的解决思路。CD40L可促进B细胞的增殖、分化和存活。本实验旨在探讨CD40L单因子诱导aALL细胞成为DC的可行性以及观察这种白血病来源的DC体外活化T细胞的能力。 方法:分离aALL初治患者骨髓液中单个核细胞(BMMNC)。采用CD40L (0.5μg/ml、1.5μg/ml、3μg/ml)单因子，加入接种有BMMNC的RPMll640完全培养基中，6天后流式细胞仪检测DC免疫表型，培养后的细胞进行染色体检查，体外激发异基因及自体T细胞增殖试验。 结果:4例aALL初治患者中3例BMMNC经CD40L培养至第72h即开始有零散集簇及小集落形成，细胞体积变大；至第6天，进一步变形，胞浆丰富，具有树突状突起的细胞增多、突起明显。光镜下观察到具有典型的DC形态特征。流式细胞仪检测显示细胞CDla、CD83、CD80、CD86表达明显上调，培养上清液可检测到IL-12、CCR7的分泌，染色体检查证实其仍具有白血病源的遗传学特征。MTT法检测表明该DC具有强大的刺激异基因T细胞增殖的能力，加入外源性IL-12后可激发自体T细胞增殖。 结论:单用CD40L可成功诱导aALL细胞体外分化为具有成熟DC表型并高表达协同刺激分子的树突状细胞。该类DC仍具有白血病的遗传学特征，并且可产生较强的刺激异基因及白体T细胞增殖的能力。为进一步深入研究aALL-DC白血病疫苗，消除aALL残存白血病并最终治愈成人急淋提供了一条全新途径，有着重要的实际意义。

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