β2-微球蛋白抗体激活非霍奇金淋巴瘤患者树突状细胞的免疫应答

摘要

目的：树突状细胞(DC)是目前已知功能最强的抗原递呈细胞，负载肿瘤抗原的DC能够有效激活细胞毒性T细胞(CTL)并产生抗肿瘤免疫的能力，对清除肿瘤微小病灶和解决肿瘤复发具有重要的意义。但由于肿瘤抗原性弱，往往制约着DC的应用。而特异性抗体可以直接诱导恶性淋巴瘤等多种肿瘤凋亡，具有针对性强等优点，并且有研究证实，部分抗体可以诱导DC激活CTL，增强抗肿瘤效应，为治愈肿瘤带来了希望。B2-微球蛋白(B2-microglobulin，B2-MG)是一种小分子蛋白类物质，以构成MHC-Ⅰ类分子表达于所有有核细胞表面。在恶性淋巴瘤中，B2-MG水平与疾病的发生、进展及疗效相关，已成为恶性淋巴瘤预后判断的重要因素之一。研究证明，B2-MG不能诱导DC成熟和T细胞活化，而B2-MG抗体是B2-MG特异性单克隆抗体，可以诱导包括NHL在内的多种血液系统恶性肿瘤细胞凋亡，并且DC上表达有B2-MG的组成成分，如MHC-Ⅰ类、CD1及FcyR分子。本实验用B2-MG抗体与NHL患者骨髓源性DC共培养，探讨B2-MG抗体能否与DC上相应分子结合以激活DC，诱导CD4+Th1细胞活化和CTL抗NHL瘤细胞效应，为增强DC疫苗在淋巴瘤治疗中的应用提供可行性依据。方法：采集初诊NHL患者正常骨髓单个核细胞，常规经GM-CSF、IL-4及TNF-a联合诱导DC生成，分别以25ug/ml B2-MG、25ug/nd B2-MG抗体及25ug/ml B2-MG加等量B2-MG抗体与DC共培养作为实验组A、B及C，以等量IgG与DC培养作为对照组A，以DC单独培养作为空白对照组。光镜下观察DC形态；流式细胞术分析DC免疫表型；ELISA法检测IFN-γ分泌情况；MTT法检测CTL；杀伤效应。结果：NHL骨髓源性DC在加入B2-MG-(实验组B)3小时后及继续培养至第8天，DC表型CD1a、CD80、CD83、CD86和HLA-DR较空白对照组未见明显升高(P>0.05)，随后与患者自身T细胞培养，亦未见IFN-γ分泌明显增多(296.37±40.04vs384.42±23.86pg/ml，P>0.05)；加入B2-MG抗体(实验组A)培养3小时后和第8天，除CD1a外其余4种表型均较实验组B、对照组A和空白对照组表达升高，与自身T细胞共培养后，上清液中IFN-γ水平(628.99±30.59pg/ml)显著高于对照组A(137.58±32.53pg/ml)和空白对照组(384.42±23.86pg/ml，P<0.05)，活化T细胞和NHL瘤细胞(Raji细胞)共孵育，杀伤率显著高于空白对照组(P<0.05)；进一步实验显示，等量25ug/mlB2-MG和B2-MG抗体共孵育30min后冲击DC(实验组C)，亦具有激活CTL的能力，与实验组A相比差异无统计学意义(P>0.05). 结论：B2-MG作为一种肿瘤相关性抗原，因抗原性弱，与DC亲和力低，不能明显诱导NHL患者骨髓源性DC成熟和CD4+Th1细胞活化；而B2-MG抗体是B2-MG特异性单克隆抗体，能够与DC结合并诱导DC成熟，同时负载B2-MG抗体的DC能够显著激活NHL患者自身CD4+Th1细胞和CTL细胞，进一步诱导对NHL瘤细胞的杀伤效应；B2-MG联合B2-MG抗体与DC共培养，亦具有激活CTL抗NHL的能力，说明NHL患者体内游离B2-MG并不能抑制B2-MG抗体对DC的激活作用。本实验为NHL的免疫治疗提供了一条新的治疗策略，为增强DC瘤苗在淋巴瘤的应用提供了新的研究模式。

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