贵州遵义地区蝙蝠脑组织中博尔纳病病毒p40基因片段及核蛋白的检测

摘要

目的：探讨贵州遵义地区蝙蝠体内是否存在博尔纳病病毒（BDV）的自然感染，将贵州遵义地区蝙蝠感染的BDV p40核苷酸序列与国外标准株、流行株进行同源性分析，进一步丰富贵州地区BDV流行病学特征。
　　方法：采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（Fluorescence quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction, FQ-RT-PCR）对82例蝙蝠额颞叶脑组织中BDV p40基因片段进行检测，阳性产物进行纯化、克隆和核苷酸序列测定，并与国外标准株、流行株比对，分析其同源性及变异；同时采用免疫印迹法（Western blotting, WB）检测蝙蝠脑组织中博尔纳病病毒核蛋白（Nucleoprotein, N）。
　　结果：贵州遵义地区82例蝙蝠额颞叶脑组织中，BDV p40基因片段的检出率是12.2％（10/82），通过美国国家生物技术信息中心（NCBI）比对、分析阳性产物的核苷酸序列，贵州遵义地区蝙蝠脑组织中的BDV p40核苷酸序列与标准株Strain V和流行株 H1766比对同源性均为96.2%，有3个碱基发生突变（nt548G>T，nt550T>G， nt553A>T），突变率为3.8%（3/78），与流行株 He/80进行同源性分析时，发现有4个核苷酸发生突变（nt548G>T，nt550T>G，nt553A>T，nt609T>C），突变率为5.1%（4/78），但所编码的氨基酸并没有变化；蝙蝠额颞叶脑组织中博尔纳病病毒核蛋白阳性率为12.2%（10/82）；其中有6例蝙蝠脑组织同时检出BDV p40基因片段及核蛋白。
　　结论：贵州遵义地区的野生蝙蝠存在博尔纳病病毒的自然感染；该地区野生蝙蝠所感染的BDV p40基因片段与标准株Strain V、流行株H1766的核苷酸序列具有高度同源性，该地区可能是BDV的流行区域之一。

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前言

1 材料与方法

1.1 实验对象

1.2 主要实验试剂

1.3 实验方法

2 结果

2.1 蝙蝠脑组织中RNA浓度及测量曲线

2.2 BDV p40阳性标本PCR扩增曲线及标准曲线

2.3 蝙蝠脑组织中BDV p40基因片段扩增曲线及溶解曲线，如下图所示：

2.4蝙蝠BDV p40基因片段阳性标本经PCR扩增后电泳图

2.5 阳性PCR扩增产物测序的结果及同源性分析

2.6 蝙蝠脑组织中BDV基因片段系统发生树分析，如下图所示：

2.7 蝙蝠脑组织中BDV核蛋白检测结果

3 讨论

4 结论

参考文献

综述: 博尔纳病毒与精神性疾病的研究进展

致谢

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