金银花和山银花多糖的结构鉴定及其生物活性研究

摘要

目的:金银花和山银花的区别一直受到激烈争论，其中对于二者所含的小分子研究较多，而对于多糖的研究却寥寥无几。本课题对山银花，金银花多糖结构和抗胰腺癌细胞生长，抗Aβ42聚集活性的区别进行了研究。
　　方法：本课题分别从1.5 kg干燥金银花药材和2.5 kg干燥山银花药材用水提醇沉的方法提取粗多糖。粗多糖（LJ和LF）分别经DEAE-cellulose52和Sephacryl S-200 HR分离纯化。纯化所得多糖经高效凝胶渗透色谱（HPGPC）分析纯度和分子量。单糖组成、甲基化、部分酸水解等化学方法以及IR、NMR等光谱学方法确定多糖结构。经MTT方法检测多糖抗胰腺癌细胞生长的影响，经硫磺素T结合实验检测多糖对Aβ42聚集的影响。
　　结果：共分离纯化得到4种金银花均一多糖（LJ-0-1，LJ-0-2，LJ-02-1，LJ-02-2）和2种山银花均一多糖（LF-02-2，LF-02-3）。其中LJ-02-1和LF-02-2，都为I型聚鼠李半乳糖醛酸（RG-I）多糖，由1,4-α-D-GalpA和1,2-α-L-Rhap交替连接构成主链，部分1,2-α-L-RhapC-4被分支取代，分支由T-β-D-Galp，1,4,6-linkedβ-D-Galp, T-α-L-Araf和1,5-linkedα-L-Araf构成。但是这两种多糖分支的连接方式有差异，且分子量也不同，LJ-02-1分子量为54 kDa，LF-02-2分子量为74.1 kDa。其余多糖的结构表征均有差异。抗胰腺癌细胞生长活性表明金银花多糖和山银花多糖都可能抑制胰腺癌细胞的生长，当多糖浓度为1 mg/mL时，LJ-02-1、LF-02-2和LF-02-3对BxPC-3, PANC-1细胞生长的抑制率分别为66.7％、52.1%，82.22%、49.73%，90.75%、67.09%。LJ-0-1和LJ-0-2对BxPC-3, ASPC-1细胞生长的抑制率分别为56.49%、55.56%，48.06%、32.74%。抗 Aβ42聚集活性实验表明，LF-02-3能抑制Aβ42聚集，但是其余多糖对Aβ42聚集基本无影响。
　　结论：通过对金银花和山银花6种均一多糖结构和生物活性研究，得知金银花和山银花均含有相类似的RG-I多糖。其它多糖的结构特征有差异。并且这些多糖对胰腺癌细胞生长和Aβ42聚集的影响也不同，为金银花和山银花区别的争论提供理论基础，和为抗胰腺癌和抗Aβ42聚集中药多糖药物的开发提供方向。

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前言

1.金银花和山银花的性状

2.金银花和山银花主要化学成分

3.金银花和山银花主要药理活性

4.金银花和山银花多糖

5.果胶

第一章 金银花多糖的化学结构和生物活性

第一节 金银花多糖的提取、分离纯化

1材料、仪器与方法

2. 结果

第二节金银花多糖结构解析

1 材料、仪器与方法

2. 结果

第三节 金银花多糖生物活性研究

1材料、仪器与方法

2.结果

3.本章讨论

4.结论

第二章 山银花多糖化学结构和生物活性研究

第一节 山银花多糖提取、分离和纯化

1材料、仪器与方法

2.结果

第二节 山银花多糖结构解析

1材料、仪器与方法

2.结果

第三节 山银花多糖生物活性研究

1.实验材料、仪器和方法

2.结果

3.讨论

4.结论

本论文总结

参考文献

综述: N-糖链和O-糖链的分离纯化及其结构鉴定

致谢

附图

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