下呼吸道感染产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的流行和耐药基因特征

摘要

目的：通过对贵州省某三甲医院下呼吸道感染患者下呼吸道分离培养的肺炎克雷伯菌（Klebsiella Pneumoniae, KP)所携带的β-内酰胺酶基因型、耐药表型以及分子流行病学特征的研究，为临床治疗相关感染提供理论指导依据。
　　方法：收集2015年1月1日-2016年2月29日间贵州省某三甲医院各个病房下呼吸道感染患者痰培养的超广谱β-内酰胺酶（Extended-spectumβ-lactamerses, ESBL）初筛阳性的KP菌株，根据美国临床和微生物标准化实验室（Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI）推荐的双纸片扩散法确定ESBL表型后纳入研究。应用聚合酶联反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）扩增常见的blaCTX-M/SHV/TEM三种ESBL基因，送测序公司双向测序后在Genbank上BLAST比对，确定KP菌株携带的基因型。同时使用全自动微生物分析仪测定KP菌株最低抑菌浓度（Minimal inhibitory concentration, MIC），明确产ESBL的KP菌株耐药表型。
　　结果：
　　1、共收集贵州省某三甲医院KP菌株155株，ESBL初筛阳性菌株59株（59/155，38.1％），ESBL表型确证后45株（45/155，29.0%）纳入研究。
　　2、通过回顾产ESBL的KP菌株临床资料，29株（29/45，64.4%）来自于普通病房，16株（16/45，35.6%）来自重症监护病房（Intensive Care Unit, ICU），23株（23/45，51.1%）来自年龄超过60岁的患者，男女比例为32:13。
　　3、45株产ESBL的KP菌株均携带一种或两种以上β-内酰胺酶基因，其中仅发现1株单独携带CTX-M型ESBL，其余均同时携带blaSHV+blaTEM或分别与blaSHV或blaTEM共同存在。45株（45/45，100%）KP菌株均携带有blaCTX-M基因，另外9株（9/45，20%）携带两种ESBL基因。
　　4、45株产ESBL KP菌株中，检出blaCTX-M-14基因型最多（32/45，71.1%），其他还发现11株blaCTX-M-15（11/45，24.4%）、10株blaCTX-M-27（10/45，22.2%）、5株blaCTX-M-3（5/45，11.1%）、2株blaCTX-M-55（2/45，4.4%）、1株blaCTX-M-1（1/45，2.2%）、1株blaCTX-M-65（1/45，2.2%）、5株blaSHV-136（5/45，11.1%）、2株blaSHV-27（2/45，4.4%）、1株blaSHV-12（1/45，2.2%）和1株blaSHV-38（1/45，2.2%）。
　　5、45株产ESBL的KP菌株对氨苄西林耐药率达100%，对头孢唑林耐药率超过90%，对哌拉西林、头孢吡肟、头孢噻肟、复方新诺明、氨曲南的耐药率超过70%。本研究中大多数（32/45，71.1%）产ESBL菌株均表现为多重耐药（Multi-drug Resistance, MDR），对大部分β-内酰胺酶类药物具有高度耐药性，对喹诺酮类、氨基糖苷类、大环类脂类等非β-内酰胺酶类抗生素的耐药率也较高。对美罗培南、亚胺培南敏感性较高，耐药率小于15%。
　　结论：
　　1、贵州省某三甲医院流行的产酶KP菌株携带的ESBL基因型以blaCTX-M为主，其检出率远超SHV酶及TEM酶，这与国内主要流行趋势相同。
　　2、产酶KP菌株携带的主要ESBL基因型依次为blaCTX-M-14、blaCTX-M-15、blaCTX-M-27、blaCTX-M-3和blaSHV-136。
　　3、ESBL在KP菌株中的检出率和多重耐药菌在KP中的比例较高，表明该医院下呼吸道感染患者痰标本分离的KP菌株耐药性问题日益严重，呈现耐药性强和种类多的特点，临床上治疗难度大，加强耐药菌株的监测已刻不容缓。

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前言

1 材料与方法

1.1 主要试剂

1.2 主要实验仪器与设备

1.3 标本来源

1.4 产ESBL菌株的初筛

1.5 K.pneumoniae菌株的传代培养

1.6 ESBL表型确证

1.7 细菌核酸的提取

1.8 产ESBL KP菌株β-内酰胺酶基因的扩增与测序

1.9 产物耐药基因型的确定

1.10 产ESBL K.pneumoniae菌株体外抗菌谱测定

2 结果

2.1 菌株鉴定情况

2.2 45株KP菌株的临床资料

2.3 45株KP菌株中β-内酰胺酶检出情况

2.4 45株KP体外抗生素敏感性结果

3 讨论

结论

参考文献

综述: 肺炎克雷伯菌耐药流行现状、耐药机制与临床应对策略

致谢

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