石榴皮提取物鞣质对鲍曼不动杆菌生物膜的影响

摘要

目的：探讨石榴皮提取物鞣质对鲍曼不动杆菌（Acinetobacter baumannii，Ab）生物膜的形成以及已形成的生物膜的影响，为临床Ab生物膜相关感染的治疗提供理论及实验依据。
　　方法：1.采用肉汤稀释法分别测定石榴皮丙酮提取物鞣质和环丙沙星（ciprofloxacin， CIP）对Ab ATCC19606最低抑菌浓度（minimum inhibitory concentration，MIC）。2.采用结晶紫染色法测定1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC的鞣质作用于Ab4h、8h、24h、48h后的光密度值；再将上述不同浓度鞣质作用Ab48h，在荧光显微镜下，观察鞣质对Ab生物膜形成的影响。3.分别配制1/2MIC、1MIC、2MIC浓度的鞣质和CIP，将两药单独及联合作用已形成的Ab生物膜4h、8h、24h、48h，采用结晶紫染色法及平板菌落计数法分别测定光密度值和菌落数；再将上述不同浓度鞣质作用已形成的Ab生物膜24h，分别在荧光显微镜和激光共聚焦显微镜（confocal Laser Scanning Micro-scope，CLSM）下，观察鞣质对已形成的Ab生物膜的影响。4.采用实时荧光定量PCR（fluorescent quantitative PCR，FQ-PCR）检测鞣质和CIP单独及联合干预生物膜相关基因自诱导合成酶基因(AbaI)、生物膜相关蛋白基因(Bap)、粘附素因子基因(CsuE)、外膜孔蛋白A基因(OmpA)的影响。
　　结果：1.石榴皮提取物鞣质和CIP对Ab ATCC19606的MIC分别为1.95 mg/mL、0.50 mg/mL。2.鞣质对Ab生物膜形成的影响：1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC浓度鞣质作用于Ab4h、8h、24h、48h后，对生物膜的形成均有抑制作用，但在48h时抑制效果最好，且当浓度由1/4MIC增加到1/2MIC时，其光密度值降低达2倍；在鞣质作用48h后，经荧光染色后，在荧光显微镜观察随着鞣质浓度增大对生物膜形成的抑制效果增强，且1/2MIC鞣质浓度时，荧光显微镜见少量稀薄点状绿色荧光。3.鞣质和CIP单独及联合干预对已形成的Ab生物膜的影响：1/2MIC、1MIC、2MIC浓度的鞣质和CIP单独及联合作用于已形成的Ab生物膜4h、8h、24h、48h后，结果显示单独用药不如联合用药效果好，且联用时以2MIC（鞣质+CIP）作用24h效果最好，其光密度值(0.40±0.17)较空白组(2.20±0.42)下降；菌落计数(12±5)×106CFU/mL较空白组(153±20)×106CFU/mL下降；荧光显微镜下仅见稀薄绿色荧光；CLSM下见大量红色荧光。4. FQ-PCR检测鞣质和CIP单独及联合干预对已形成的Ab生物膜相关基因AbaI、Bap表达上调，OmpA、CsuE基因表达下调。
　　结论：1.石榴皮提取物鞣质对Ab生物膜形成有一定的抑制作用，在本实验剂量范围内，随着浓度增大其效果增强，1/2MIC鞣质能抑制>50％的生物膜量形成；2.石榴皮提取物鞣质或CIP单独作用对已形成的Ab生物膜的影响效果不如联用效果好，当联用时对生物膜有一定的破坏和清除作用，以2MIC鞣质与2MIC CIP联用效果最好，能清除大部分的生物膜；3.石榴皮提取物鞣质和CIP可能通过影响与生物膜形成相关基因的（AbaI、Bap、CsuE、OmpA）的表达而影响生物膜的形成。

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前言

1 材料与方法

1.1 主要实验材料

1.2 主要实验试剂

1.3 主要实验仪器

1.4 实验方法

1.5统计学方法

2 结果

2.1石榴皮提取物鞣质和CIP对Ab MIC结果

2.2石榴皮提取物鞣质对Ab生物膜形成的影响

2.3石榴皮提取物鞣质对已形成Ab生物膜的影响

2.4 鞣质对Ab生物膜相关基因表达影响

3 讨论

4 结论

参考文献

综述: 鲍曼不动杆菌生物膜的研究进展

致谢

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