强直性脊柱炎患者HLA-B27基因亚型、KIR基因和HLA-Cw基因相关性研究

摘要

背景：强直性脊柱炎(Ankylosing Spondylitis,AS)是一种慢性炎症性疾病，主要侵及骶髂关节、脊柱骨突、脊柱旁软组织。虽然AS病错综复杂，是多因素综合作用的结果，但是大量证据表明AS的发生具有高度遗传易感性。1973年研究表明HLA-B27与AS强相关，并且在AS发病机制中起有重要作用。目前数据表明，大约7％亚洲人的HLA-B27是阳性的，其中3% HLA-B27阳性的个体会发展为AS患者。但是，大量基因组扫描和相关性研究证实，除了HLA-B27，其它基因（KIR、HLA-Cw等）也涉及到该疾病的病因。迄今，没有研究表明在AS患者中，KIR多态性、HLA-C等位基因和HLA-B27存在相关性。因此，本研究通过对25例HLA-B27阳性活动性AS患者和41例HLA-B27阳性静止期AS患者的临床资料收集和临床评估，及对患者的KIR基因、HLA-Cw基因和HLA-B27基因的检测，分析B27阳性AS患者中HLA-B27亚型、KIR基因和HLA-Cw基因的分布频率，以及KIR基因型、HLA-Cw基因型和HLA-B27亚型与AS活动性的相关性。
　　目的：分析HLA-B27基因多态性、KIR基因和HLA-Cw与强直性脊柱炎(AS)活动性的关系。
　　方法：
　　1.知情同意留取患者血样本6ml和收集强直性脊柱炎患者病历资料，以及进行Bath疾病活动指数和功能指数评分，
　　2.流式细胞术：取EDTA抗凝全血样本2ml，通过流式细胞术检测外周血白细胞HLA-B27的表达。
　　3. DNA模板的制备：采用天根血液基因组DNA提取试剂盒（离心柱型），提取冻存（-20℃）的2ml全血标本中的DNA。
　　4. HLA-B27亚型检测：使用HLA-B27基因高分辨检测试剂盒，可检测HLA-B2701至B2712亚型。按照试剂盒操作说明书进行PCR反应体系的配制和PCR扩增反应。
　　5. KIR+HLA-Cw基因检测：使用KIR+HLA-Cw基因分型低分辨检测试剂盒，按照试剂盒操作说明书进行PCR反应体系的配制和PCR扩增反应。
　　结果：
　　1.与静止期AS患者比较，活动性AS患者HLA-Cw02、HLA-Cwlys的基因频率增高，差异有统计学意（P<0.05）。
　　2.与静止期AS患者比较，活动性AS患者KIR3DS1的基因频率增高，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　结论： KIRs和HLA-Cw与AS的活动性有关。

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前言

材 料 和 方 法

1 材料

2 实验方法

结果

3.1 流式细胞术检测结果

3.2 患者的临床分布特点

3.3 HLA-B27亚型分析

3.4 HLA-Cw、KIR亚型分析

讨论

结论

参考文献

致谢

附录

附录A中英文缩略语对照表

附录B主要试剂配制

附录C综述 医学综述:HLA-B27、HLA-Cw、KIRs与强直性脊柱炎

附录D强直性脊柱炎病案表