阿片/神经肽FF受体双功能肽BN-9的化学构建、鉴定和无耐受镇痛作用研究

摘要

临床上中度和重度疼痛治疗的一线药物为阿片类镇痛药，然而，阿片药物的长期使用常伴随着不同程度的副作用，如便秘、呼吸抑制、耐受发展和躯体依赖等，从而限制其临床治疗的应用范围。近年来，双功能阿片药物的研究为高效、低副作用镇痛新药研发提供一种新策略，引起广泛的关注。神经肽 FF（NPFF）属于含有两种前体（pro-NPFFA和pro-NPFFB）和两种G蛋白偶联受体（NPFF1和NPFF2）的神经肽家族，其被认为是一种内源性阿片调节肽。本实验室在前期研究中发现基于内吗啡肽2和NPFF构建的嵌合肽EN-9，能介导无耐受的镇痛作用。基于以上研究，本论文设计并化学构建了以阿片肽biphalin和NPFF为化学模板的阿片/NPFF受体的双功能分子BN-9，并通过体外cAMP功能实验和体内镇痛和耐受实验对其进行全面的药理学活性鉴定，此外还评价了BN-9的便秘、成瘾和运动协调性抑制等阿片样副作用。
　　本论文的研究结果表明，BN-9在体外cAMP功能性实验中表现为阿片/NPFF受体的双功能激动剂，能同时激活μ-、δ-、κ-、NPFF1和NPFF2受体。在小鼠光热甩尾实验中，BN-9产生剂量依赖的镇痛作用，且其镇痛效价与吗啡（morphine）大致相当。BN-9的镇痛作用能被μ-和κ-阿片受体拮抗剂选择性拮抗，并且其中枢镇痛作用能被NPFF受体拮抗剂RF9加强，验证了BN-9双功能激动剂的药理学特性。而且当以腹腔途径给药时，BN-9所产生的系统镇痛作用能被腹腔注射外周作用的阿片受体拮抗剂甲碘化纳洛酮完全阻断，但不受侧脑室注射甲碘化纳洛酮影响，暗示着BN-9不能通透血脑屏障，主要是通过外周阿片受体来介导其系统镇痛作用。进一步，在小鼠福尔马林痛、醋酸扭体痛和手术后痛等不同模型痛中，腹腔注射BN-9都能产生剂量依赖的镇痛作用，其镇痛作用主要通过外周阿片受体来介导，而独立于NPFF系统。值得一提的是，连续8天重复注射BN-9在脊髓以上、脊髓和系统水平引起的镇痛作用均未出现耐受现象，但侧脑室连续共注射BN-9以及NPFF受体拮抗剂RF9却出现了镇痛耐受，表明NPFF受体参与了其中枢镇痛耐受的过程。与吗啡相比，BN-9表现出更低的胃肠运动抑制作用。并且，BN-9对运动协调性影响较小，侧脑室注射 BN-9能产生条件位置偏爱现象。
　　综上所述，本研究成功构建了阿片/NPFF受体的双功能激动剂 BN-9，能产生高效、无耐受的镇痛作用，其便秘副作用有所降低。并且，腹腔注射BN-9能在多种病理痛模型中介导高效镇痛作用。总之，本研究为寻找高效、低副作用的阿片镇痛新药提供了先导化合物和新策略。

目录

声明

第一章 研究背景

1.1 阿片系统简介

1.1.1 阿片受体及其配体

1.1.2 阿片镇痛作用

1.1.3 阿片副作用

1.2 神经肽FF系统简介

1.2.1 神经肽FF及其前体

1.2.2 神经肽FF受体

1.2.3 神经肽FF的阿片调节作用

1.2.4 神经肽FF的其它生理功能

1.3 阿片系统相关双功能配体的研究进展

1.3.1 阿片系统/阿片系统双功能配体

1.3.2 阿片系统/孤啡肽系统双功能配体

1.3.3 阿片系统/神经激肽系统双功能配体

1.3.4 阿片系统/胆囊收缩素系统双功能配体

1.3.5 阿片系统/神经降压素系统双功能配体

1.3.6 阿片系统/咪唑啉I2受体系统双功能配体

1.3.7 阿片系统/黑皮质素系统双功能配体

1.3.8 阿片系统/其它系统的双功能配体

第二章 立题依据

第三章 材料与方法

3.1 材料

3.1.1 实验动物

3.1.2 试剂和药品

3.1.3 仪器

3.2 方法

3.2.1 多肽的合成与纯化

3.2.2 cAMP功能鉴定

3.2.3 侧脑室埋管

3.2.4 光热甩尾实验

3.2.5 福尔马林痛实验

3.2.6 醋酸扭体痛实验

3.2.7 足底切口痛模型和Von Frey实验

3.2.8 酶解稳定性实验

3.2.9 转棒实验

3.2.10 镇痛耐受实验

3.2.11 条件位置偏爱实验

3.2.12 胃肠运动实验

3.2.13 药物注射方法

3.2.14 数据统计和分析

第四章 实验结果

4.1 BN-9的体外功能性实验

4.2 BN-9的镇痛作用及其作用机制研究

4.2.1 BN-9在急性痛中的镇痛作用及其作用机制研究

4.2.2 BN-9在小鼠病理性模型痛中的镇痛作用及其作用机制研究

4.2.3 BN-9的酶解稳定性研究

4.3 BN-9的副作用研究

4.3.1 BN-9在影响运动协调性方面的评价

4.3.2 BN-9在镇痛耐受方面的评价

4.3.3 BN-9对奖赏系统影响的评价

4.3.4 BN-9对胃肠运动影响的评价

讨论

结论

参考文献

在学期间的研究成果

致谢

附录

附录I 缩略语索引

附录II 合成的化合物质谱图