中药康肾合剂对酒精性肾损伤大鼠的疗效与机制研究

摘要

目的：探索酒精诱发大鼠肾损伤过程，是否与细胞线粒体氧化反应及TGF-β/Smads 信号通路有关，研究中药康肾合剂(KSP)对酒精性肾损伤的疗效与机制。 方法：1）将56°酒精（441.84g/L）稀释成400g/L灌胃（20ml/kg，2次/日）建立肾损伤Wistar大鼠模型（35只），空白对照组给予生理盐水灌胃（20ml/kg，2次/日，15只），6周后，检测模型组（n=5）和空白组（n=5）血尿素氮、肌酐及评估肾脏指数，并观察肾脏形态学变化。2）于造模成功后，空白对照组与模型组继续给予生理盐水（20ml/kg/d，各 10 只），康肾合剂组和依那普利组（阳性对照组）分别给予康肾合剂（12ml/kg/d，n=10）与依那普利（10ml/kg/d，n=10）。治疗2周和6周后，分别收集其血清和肾脏，评估肾功能（BUN、Scr）和肾脏指数并观察肾组织病理变化（SEM，HE 和天狼星红染色），同时检测肾组织中凋亡蛋白（Cyt-c、Caspase-8、Caspase-9、Bax、Bcl2和p53）（WB），血管内皮细胞增生的标记分子CD34(IHC-P)和纤维化相关基因（TGF-β、Smad3、Smad7、Col1a1）（RT-PCR）。 结果：1）与对照组比较，6 周后模型组肾小球壁及肾小管可见大量的胶原纤维蛋和炎性细胞浸润，并可见从皮质内毛细血管球周围向髓质延伸的小血管明显增多，肾脏指数、肾小管扩张度及肾功能指标均有显著差异（P<0.05）。2）治疗2周后，与模型组比较，康肾合剂组中TGF-β、Smad3基因显著下调，而Smad7显著上调（P<0.05），依那普利组中 TGF-β、Smad3 和 Col1a1 基因均显著下调（P<0.05）。3）治疗6周后，与正常组比较，模型组中CD34、Cyt-c、Caspase-8、Caspase-9、Bax、Bcl-2和p53蛋白的表达均显著升高（P<0.05），且TGF-β、Smad3、和Col1a1基因均显著上调（P<0.01），而Smad7基因明显下调（P<0.01）。经康肾合剂和依那普利治疗6周后，肾小管周围的胶原纤维，血清中Scr、BUN及肾组织中CD34、Cyt-c、Caspase-8、Caspase-9、Bax和p53等蛋白的表达量均发生明显下降，而 Bcl-2 蛋白显著升高（P<0.01）；同时肾脏中 TGF-β、Smad3、和Col1a1基因明显下调（P<0.01），而Smad7基因显著上调（P<0.01）。 结论：1.大鼠酒精性肾损伤可能与线粒体氧化激活的JNK信号通路有关。 2.酒精诱发的大鼠肾血管内皮细胞增生和肾间质纤维化可能与TGF-β/Smads信号通路有关。 3.中药康肾合剂通过调节TGF-β/Smad信号通路抑制线粒体氧化反应、细胞凋亡、炎症反应进而缓解酒精性肾损伤的发展。

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