民族药槐枝抗心肌缺血缺氧药效物质基础研究

摘要

槐枝为贵州省民族药之一，是豆科植物槐Sophora japonicaL.的新鲜或干燥嫩枝，具有散瘀止血，清热燥湿，祛风杀虫等功效，用于治疗崩漏，赤白带下，痔疮，阴囊湿痒，心痛，目赤，疥癣等症。药用历史悠久，最早收载于《名医别录》。历代医书记载其用于治疗心痛，槐枝治疗的“心腹痛”“卒心痛”等与现代医学的心肌缺血缺氧以及心肌梗死具有一定的相似性。但目前缺乏槐枝的化学活性物质及相关药理作用的研究，特别是有关槐枝抗心肌缺血缺氧的相关研究报道，成为阻碍槐枝药材治疗心痛药物开发和应用的重要因素。为了更好的的开发、利用民族药材槐枝，本文主要做了以下方面的研究:
　　采用气相色谱-质谱联用法分离鉴定槐枝鲜品和干品挥发性成分，从新鲜槐枝挥发油中分离出60种成分，鉴定出58种化学成分，占挥发油总量的97.73％;从干燥槐枝挥发油中分离出56种成分，其中鉴定出46种化学成分，占挥发油总量的92.86％。新鲜和干燥槐枝主要成分为烷、烯、醇、酸、酯等，其中棕榈酸、亚油酸、油酸等含量相对较高，而干燥槐枝还含有与其抗心痛相关的活性成分角鲨烯，且含量较高。从挥发油化学组成和药材存储等角度，建议槐枝在治疗心痛时应以干燥品为主。
　　采用腹腔注射盐酸异丙肾上腺素(ISO)建立小鼠心肌缺血缺氧模型，观察槐枝各萃取部位对小鼠心电图S-T段的影响，槐枝正丁醇及乙酸乙酯萃取部位高、低剂量（高剂量相当于原药材8g/kg、低剂量相当于原药材4g/kg，下同）均能极显著的抑制小鼠心电图S-T段抬高;并采用常压耐缺氧模型，观察槐枝各萃取部位对小鼠存活时间的影响，槐枝乙酸乙酯萃取部位高低剂量能极显著的延长小鼠存活时间，槐枝乙酸乙酯萃取部位高剂量能显著的延长小鼠存活时间。说明槐枝乙酸乙酯及正丁醇萃取部位具有明显的抗心肌缺血缺氧作用，且槐枝乙酸乙酯萃取部位抗心肌缺血缺氧作用强于槐枝正丁醇萃取部位。
　　利用大孔树脂AB-8对具有抗心肌缺血缺氧作用的槐枝乙酸乙酯及正丁醇萃取部位依次用水、50％乙醇及95％乙醇进行梯度洗脱，以15min内小鼠Ⅱ导联心电图S-T段（J点）变化的幅度，血清及心肌组织生化指标，小鼠心肌组织显微结构变化，小鼠常压耐缺氧存活时间为指标对槐枝各洗脱物进行抗心肌缺血缺氧活性筛选。研究结果显示槐枝正丁醇萃取部位50％乙醇洗脱物及槐枝乙酸乙酯萃取部位95％乙醇洗脱物可显著减少小鼠心电图ST段的偏移量，可显著降低小鼠血清中的CK活性及CK-MB、cTn-Ⅰ的含量，可显著提高心肌组织SOD活性、降低MDA含量，可显著延长小鼠常压耐缺氧时间，保护心肌组织损伤。提示槐枝正丁醇萃取部位50％乙醇洗脱物和槐枝乙酸乙酯萃取部位95％乙醇洗脱物为槐枝抗心肌缺血缺氧活性部位。采用理化鉴别的方法对活性洗脱物进行化学成分定性研究，发现其主要为黄酮类成分，提示槐枝抗心肌缺血缺氧活性部位可能为黄酮类成分。
　　采用现代的分离方法对具有抗心肌缺血缺氧活性的槐枝乙酸乙酯萃取部位95％乙醇洗脱物的化学成分进行分离，得到一个无色簇状针晶化合物，通过物理性质及波谱数据鉴定为高丽槐素。通过建立钙离子拮抗模型对其进行初步药效研究，发现其具有一定的钙离子拮抗活性，提示高丽槐素可能是槐枝抗心肌缺血缺氧活性成分之一。
　　本文建立了槐枝药材中与抗心痛相关的活性成分高丽槐素的HPLC含量测定方法，在所建立的提取方法和色谱条件下高丽槐素与相邻峰达到基线分离，重现性及线性关系良好，且回收率高，为更好地控制槐枝药材及其制剂的内在质量提供了依据。

目录

声明

摘要

前言

第一章 鲜干槐枝中挥发油化学成分研究

1 实验材料与仪器

1．1 实验材料

1．2 仪器

1．3 试剂与试药

2 实验方法及结果

2．1 实验方法

2．2 实验结果

3 结论与讨论

第二章 民族药槐枝各萃取部位抗心肌缺血缺氧药效研究

1 实验材料与仪器

1．1 实验材料

1．2 仪器

1．3 试剂与试药

1．4 实验动物与分组

2 实验方法及结果

2．1 实验方法

2．2 实验结果

3 结论与讨论

第三章 民族药槐枝各洗脱物抗心肌缺血缺氧药效研究

1 实验材料与仪器

1．1 实验材料

1．2 仪器

1．3 试剂与试药

1．4 实验动物与分组

2 实验方法及结果

2．1 实验方法

2．2 实验结果

3 结论与讨论

第四章 槐枝抗心肌缺血缺氧活性洗脱物化学成分定性研究

1 实验材料与仪器

1．1 实验材料

1．2 仪器与试剂

2 实验方法与结果

2．1 实验方法

2．2 实验结果

3 结论与讨论

第五章 槐枝乙酸乙酯萃取部位95％乙醇洗脱物化合物分离、鉴定及初步药效研究

1．实验材料与仪器

1．1 实验材料

1．2 试剂与试药

2 实验方法及结果

2．1 化合物分离及结构鉴定

2．2 化合物初步药效研究

2．2 实验结果

3 结论与讨论

第六章 民族药槐枝中高丽槐素的含量测定HPLC方法建立

1 实验材料与仪器

1．1 实验材料

1．2 仪器

1．3 试药

2 实验方法及结果

2．1 实验条件及选择

2．2 对照品溶液的制各

2．3 供试品溶液的制备

2．4 测定方法

2．5 提取方法考察

2．6 提取溶剂的考察

2．7 提取时间的考察

2．8 线性关系考察

2．9 精密度试验

2．10 稳定性试验

2．11 重复性试验

2．12 加样回收率试验

2．13 样品测定

3 结论与讨论

总结与展望

参考文献

附录一 缩略语表

综述

附录三 图片或病例收集资料等

致谢

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