锦鲤疱疹病毒几种重要基因及基因工程疫苗的研究

摘要

高密度集约化养殖成为当下主要的水产养殖方式，带来较大收益的同时也导致鱼类病毒的更大范围的流行。传统使用化学消毒剂以及抗生素的鱼病防治策略引发了一系列严峻问题。鱼用疫苗作为一种经济高效的水产养殖防治措施渐渐引起大家的关注与重视。鲤鱼是我国的主要食用鱼种，在我国得到大范围的养殖，创造了巨大的经济效益。锦鲤是一种观赏用的花色鲤鱼，体色漂亮，色彩鲜艳，是淡水养殖观赏鱼中的精品，被称为水中宝石。1998年由以色列开始暴发的锦鲤疱疹病毒病给食用鲤鱼和观赏锦鲤的养殖造成了极大的危害，该病已在世界范围内被发现并造成了严重的经济损失。锦鲤疱疹病毒的全基因组序列已被测定，但是有关该病毒更进一步的信息目前研究的很少。
　　本文对锦鲤疱疹病毒序列进行生物信息学分析并选取了ORF25，ORF99，ORF115，ORF131，ORF139共五个基因蛋白的部分序列作为保护性抗原，对五个抗原蛋白进行分子克隆和原核细胞的表达与纯化。同时本实验室构建了自己的锦鲤尾鳍细胞细胞株和金鱼尾鳍细胞株，用于锦鲤疱疹病毒的增殖。实验后期对上述五个抗原蛋白进行疫苗保护性评价。本文同时选取了锦鲤疱疹病毒炎症相关基因可溶性肿瘤坏死因子受体(STNFRs)ORF4，ORF12以及白细胞介素-10(IL-10)ORF134和G蛋白偶联受体(GPCR) ORF16进行293T细胞pEGFP-C3载体转染，并利用激光共聚焦手段结合罗丹明标记的鬼笔环肽F肌动蛋白染色对上面四个炎症因子基因进行了细胞定位分析，同时对其他的一些相关病毒基因进行了病毒感染宿主细胞后0-96h时间段内的的定量PCR测定。