Raf激酶抑制蛋白调控ERK信号通路在糖尿病肾脏疾病发病中的作用及药物干预研究

摘要

目的：1.通过检测糖尿病肾病大鼠模型肾组织 RKIP、P-ERK1/2表达状况来探讨RKIP调控ERK信号通路在糖尿病肾病发病中的作用。2.研究利妥昔单抗对糖尿病肾病大鼠肾组织RKIP、P-ERK1/2表达的影响，探讨其治疗糖尿病肾病可能的新机制。
　　方法：60只SD大鼠随机取20只作为正常对照组（N组），剩余40只大鼠予高糖高脂饮食，间断CFA（完全弗氏佐剂）联合 STZ（链脲佐菌素）造糖尿病模型，以连续2次随机血糖＞16.65mmol/L为糖尿病模型成立。造模后14周24小时尿蛋白＞30mg为糖尿病肾病成模标准。将糖尿病肾病模型SD大鼠随机分2组，糖尿病肾病组（M组），利妥昔单抗治疗组（D组）。将D组按不同观察时间(2w、4w)用利妥昔单抗58mg／kg/w的药量进行尾静脉推注（模拟静脉点滴速度）。同时，N组与M组给予等量生理盐水做对照。分别于模型成功及利妥昔药物治疗后第2w、4w周留取大鼠尿和肾组织标本，比较N组、M组、D组、大鼠肾小球结构和功能的改变，HE、PAS染色观察肾组织病理改变，免疫组化方法检测各组肾组织RKIP、P-ERK1/2表达，Western blotting检测各组RKIP的表达。
　　结果：
　　(1)造模后5只大鼠未成模，成模率87.5％，成模后大鼠因血糖控制不佳死亡3只，病死率5％。
　　(2)M组及D组大鼠大鼠随着病程的延长，血糖显著升高，出现蛋白尿，肾重增加，与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。D组大鼠尿蛋白轻度减少，但与M组差别无显著性（P＞0.05）。
　　(3)病理组织学观察M组出现肾小球基底膜增厚、系膜细胞增生、细胞外基质沉积、单核巨噬细胞浸润、肾小管上皮细胞变性或脱落等变化；D组（利妥昔单抗组）较M组肾小球基底膜增厚轻度减轻，系膜细胞增生及细胞外基质沉积、单核巨噬细胞浸润减少。
　　(4)与对照组比较，M组、D组大鼠肾组织内P-ERK1/2明显增高，RKIP降低，差异有统计学意义(P<0.05);经利妥昔单抗治疗后，D组与M组同期相比P-ERK1/2表达减少、RKIP表达增多,但差异无统计学意义(P＞0.05)。
　　结论：1、糖尿病大鼠肾脏疾病形成过程中，肾脏组织磷酸化ERK1/2表达明显增加，存在Raf-I／MEK／ERKl，2信号转导通路的活化,RKIP表达水平下降，糖尿病肾脏疾病发展过程中肾脏组织Raf-I／MEK／ERKl，2信号转导通路的的激活与RKIP表达下降有关。
　　2、给予利妥昔单抗治疗后对糖尿病肾病大鼠的血糖、尿蛋白及肾组织RKIP、P-ERK1/2表达的影响无明显统计学差异。

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封面

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中文摘要

略缩词表

前言

材料和方法

1 、实验材料

2、实验方法

3 、统计学分析

结果

1、大鼠一般情况

2、各组大鼠血糖水平变化

3、大鼠的体重，肾重，肾重指数比较

4、各组大鼠24h尿蛋白定量

5、肾脏组织学改变

6、大鼠肾组织P-ERK1/2，RKIP免疫组织化学分析

7、糖尿病大鼠肾组织P-ERK1/2与RKIP表达的相关性

7、肾组织RKIP 的蛋白结果

附图

讨论

1、RKIP在糖尿病肾脏疾病中对ERK信号通路的调节

2、利妥昔单抗对糖尿病肾病大鼠的影响及对RKIP、ERK表达的影响

结论

参考文献

致谢

英文摘要

声明

附 综述 : ERK信号转导通路在糖尿病肾脏疾病中的作用