TET2在成脂分化中的作用及分子机制

摘要

哺乳动物脂肪的积累源于过剩能量摄入。脂肪细胞是哺乳动物储存脂肪的主要场所。过高的能量摄入消耗比会导致脂肪细胞的过度增生和过度肥大，导致肥胖症及多种并发症。脂肪细胞的过度增生基于多功能间充质干细胞的定向和分化。位于脂肪组织和骨髓血管基质层的多功能间充质干细胞可定向为前脂肪细胞，前脂肪细胞在成脂分化信号通路的调控下分化为脂肪细胞。成脂分化信号通路包括一系列转录因子级联激活。其中C/EBPβ对下游C/EBPα和PPARγ表达的激活是一个重要环节。活化的C/EBPβ结合到Cebpa和Pparg启动子C/EBP结合位点上，起始C/EBPα和PPARγ的表达。Cebpb基因中也包含C/EBP结合位点，说明C/EBPβ也参与自身的表达调控。DNA甲基化和去甲基化在哺乳动物生命过程中扮演着重要角色，与基因表达与沉默密切相关。DNA去甲基化是哺乳动物胚胎发育等过程中发生的重要事件。TET家族是一类双加氧酶，能羟基化5mC，将其转化为5hmC。5mC的羟甲基化反应是重要的表观遗传学修饰，与DNA的去甲基化密切相关。本研究发现，TET2在3T3-L1成脂分化过程中是必需的。本文初步探讨了TET2在3T3-L1成脂分化过程中的作用及机制。敲减TET2的3T3-L1细胞成脂分化受阻;TET2很有可能参与成脂分化转录因子的转录调控:TET2与C/EBPβ形成复合物，在后者的募集下，催化C/EBP结合位点附近的CpG羟甲基化，促进C/EBPα转录的起始，或维持C/EBPβ自身的表达。

目录

声明

摘要

第1章 前言

1．1 DNA甲基化

1．1．1 DNA甲基化概述

1．1．2 DNA甲基化的机制

1．1．3 5mC在晡乳动物基因组中的分布

1．1．4 DNA甲基化的分子生物学意义

1．1．5 DNA甲基化与疾病

1．2 TET家族与DNA去甲基化

1．2．1 TET家族概述

1．2．2 DNA去甲基化的机制

1．2．3 TET家族在DNA去甲基化中的作用

1．2．4 TET蛋白介导的DNA去甲基化与表观遗传学重编程

1．3 脂肪分化

1．3．1 能量代谢与脂肪细胞

1．3．2 3T3-L1成脂分化过程中的重要事件

1．3．3 C／EBPβ

第2章 材料与方法

2．1 常用试剂与药品

2．1．1 分子克隆

2．1．2 细胞实验

2．1．3 蛋白质相关实验

2．1．4 RNA相关实验

2．1．5 羟甲基化DNA免疫共沉淀(hMeDIP)

2．2 常用材料与仪器

2．3 实验方法

2．3．1 分子克隆

2．3．2 细胞实验

2．3．3 蛋白质相关实验

2．3．4 RNA相关实验

2．3．5 羟甲基化DNA免疫共沉淀(hMeDIP)

第3章 结果与分析

3．1 3T3-L1成脂分化过程伴随TET2表达量的上升

3．2 在3T3-L1中敲减TET2抑制成脂分化

3．3 5-氮胞苷处理3T3-L1促进成脂分化转录因子的表达

3．4 诱导后Cebpa和Cebpb特定位点附近羟甲基化水平升高

3．5 TET2与C／EBPβ存在相互作用

第4章 讨论

参考文献

致谢