姜黄素对宫颈癌荷瘤裸鼠的治疗作用及作用机制探讨

摘要

目的：（1）通过对石油醚(J石)、超临界 CO2(J超)、压榨法(J压)、水蒸气法(J水)四种方式提取的莪术中姜黄素对 Hela细胞影响的研究，筛选出药物的最佳提取方式；（2）探讨J压对宫颈癌Hela细胞荷瘤裸鼠的治疗作用及其可能的作用机制。
　　方法：采用MTT法检测四种方式提取的姜黄素作用于Hela细胞72h后对细胞增殖抑制率及IC50的影响，并检测乳酸脱氢酶（LDH）的活性；以48只Balb/c雌性裸鼠为受试对象，8只予腋下接种0.2ml生理盐水（NS，正常对照组），其余40只裸鼠采用腋下接种 Hela细胞（3×106个/只）建立宫颈癌裸鼠模型。建模裸鼠随机分为5组（n=8）：模型组（NS）、阳性药对照组（5-Fu）、J压高剂量组（240mg/kg）、J压中剂量组（120mg/kg）、J压低剂量组（60mg/kg），共计6个实验组。检测瘤重、瘤体积计算抑瘤率；凝固法检测裸鼠凝血功能；HE染色观察肿瘤组织病理组织学改变；免疫组化法检测肿瘤组织 CD105的表达计数微血管密度（MVD）并检测 VEGF、IFN-γ的表达；流式细胞仪检测肿瘤组织细胞周期和凋亡率。
　　结果：（1）四种工艺提取的姜黄素对宫颈癌Hela细胞的生长都有明显的抑制作用，最高抑制率可分别为：J石86.48％±4.92%,J超93.86%±4.01%,J压99.13%±1.09%,J水93.35%±2.64%,且呈现出一定的剂量依赖关系；其中 J压在320μg/ml时抑制效果最明显，IC50为96.86μg/ml,最大LDH值为413.10±16.76U/L。（2）J压高、中、低剂量组瘤重与模型组比较明显减轻（P＜0.05，P＜0.01）；高、中剂量组瘤体积与模型组比较明显缩小（P＜0.01），J压高、中、低剂量组抑瘤率分别达59.56%、32.43%、20.14%；凝血功能结果显示，模型组 PT、TT、APTT与正常对照组比较明显缩短（P＜0.05，P＜0.01），J压高、中、低剂量组与模型组相比显著延长（P＜0.05，P＜0.01）；免疫组化检测肿瘤组织CD105、VEGF和IFN-γ的表达：J压高、中剂量组CD105的表达较模型组明显降低（P＜0.05）；J压高、中剂量组 VEGF的表达较模型组明显降低（P＜0.01）；J压高、中、低剂量组 IFN-γ的表达较模型组升高（P＜0.05，P＜0.01）；流式细胞仪检测：J压高、中、低剂量组的凋亡率较模型组明显增加(P＜0.01），高剂量组的G0-G1期细胞率较模型组明显增高、G2/M期的细胞率较模型组明显降低（P＜0.05，P＜0.01)。
　　结论：（1）四种方式提取的姜黄素均可不同程度抑制宫颈癌Hela细胞的生长，J压的抑制效果最好；（2）宫颈癌模型荷瘤裸鼠造模成功；（3）姜黄素能缩小肿瘤体积、减轻瘤重，对宫颈癌模型荷瘤裸鼠具有一定的治疗作用,其机制可能是：①姜黄素可降低促血管形成因子 VEGF的表达，升高血管形成抑制因子IFN-γ的表达，从而抑制新生血管形成，减少肿瘤组织的血液及营养供应，从而发挥治疗作用；②姜黄素可改善宫颈癌裸鼠的血液高凝状态，从而发挥抗血栓形成作用；③姜黄素使肿瘤细胞处于 G0-G1期，抑制肿瘤细胞的分裂增生，从而减缓肿瘤的发展进程。

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