Aida对脂肪储存的调控

摘要

甘油三酯(TAG)是真核细胞储存能量的基本单位，白色脂肪细胞超过百分之九十是由TAG组成，肝细胞合成TAG组装成极低密度脂蛋白分泌到血液中被其他组织吸收利用，乳腺上皮细胞也需要合成TAG来产生乳汁，TAG的合成对于小肠上皮细胞从食物中吸收脂肪是必需的。但TAG的异常累积会导致以肥胖为主的代谢综合症，通过增加糖尿病和心血管疾病的风险带来极高的死亡率，已严重威胁全人类健康。TAG通过甘油磷酸和单酰甘油两条途径合成，由多种酶参与。但目前对于这些酶的调控机制还未研究透彻。本文发现Refed或是橄榄油灌胃后，Aida-/-小鼠空肠Gpat3蛋白水平显著高于WT。 Gpat3是甘油磷酸途径中的限速酶，因此Gpat3蛋白水平的升高导致Aida-/-小鼠对脂肪的吸收及TAG的重新合成能力增强，释放到血清的乳糜微粒增多，促进高脂诱导的肥胖，脂肪肝，胰岛素抵抗。在机制上我们的实验数据表明，Gpat3是内质网相关降解途径(ERAD)的底物， Aida通过增强Gpat3与其泛素连接酶Hrd1的相互作用，促进Gpat3的降解。总的来说，Aida在调节机体对膳食脂肪的吸收和储存，以及肥胖及其并发症的发展等方面发挥重要作用，对这些调控过程的了解将可能为我们预防和治疗人类的代谢综合症提供新的的思路。

目录

声明

摘要

第一章 前言

1．1 甘油三脂的合成和储存

1．1．1 甘油三脂的简介

1．1．2 甘油三脂的吸收

1．1．3 甘油三脂的合成

1．1．4 乳糜微粒的组装

1．1．5 甘油三酯的储存

1．2 甘油-3-磷酸脂酰转移酶GPAT

1．2．1 GPAT的简介

1．2．2 GPAT3的简介

1．2．3 GPAT3的组织表达

1．2．4 GPAT3的生理功能

1．3 内质网相关蛋白降解ERAD

1．3．1 ERAD的简介

1．3．2 ERAD的机制

1．3．3 ERAD与脂稳态

1．4 ERAD中的泛素连接酶

1．4．1 参与ERAD的泛素连接酶简介

1．4．2 泛素连接酶Hrd1

1．4．3 泛素连接酶Gp78

1．5 Axin相互作用蛋白Aida

1．5．1 Aida的简介

1．5．2 Aida的生物学功能

1．6 立题背景

第二章 材料和方法

2．1 仪器、药品和试剂

2．2 DNA相关实验

2．2．1 质粒载体

2．2．2 大肠杆菌感受态细胞的制备

2．2．3 DNA的转化

2．2．4 质粒DHA的提取

2．2．5 质粒DNA的工具酶处理

2．2．6 DNA片段的纯化

2．2．7 DNA连接反应

2．2．8 非连接酶依赖性克隆

2．2．9 聚合酶链式反应

2．2．1 0 质粒的构建

2．3 细胞相关实验

2．3．1 细胞培养

2．3．2 瞬时转染

2．3．3 慢病毒感染

2．4 蛋白质相关实验

2．4．1 免疫共沉淀

2．4．2 蛋白质的SDS-PAGE电泳与western blot分析

2．5 动物相关实验

2．5．1 小鼠的品系与饲养

2．5．2 小鼠组织切片

2．5．5 透射电镜

2．5．6 葡萄糖耐受和胰岛素耐受测试

2．5．7 小鼠代谢笼分析

2．5．8 小鼠脂肪吸收

2．5．9 甘油三酯含量测定

2．5．1 0 小鼠小肠蛋白质的western blot分析

2．5．1 1 实时定量PCR

2．6 统计分析

第三章 结果和讨论

3．1 结果

3．1．1 Aida-/-小鼠易于肥胖

3．1．2 进食量和能量消耗不是Aida-/-小鼠肥胖表型的原因

3．1．3 Aida缺失后对脂类的吸收上调

3．1．4 Aida-/-小鼠对脂类吸收的提高是由于TAG合成增加

3．1．5 Aida通过泛素-蛋白酶体途径下调Gpat3蛋白水平

3．1．6 Gpat3被ERAD途径中的E3泛素连接酶Hrd1／Gp78降解

3．1．7 Gpat3与Hrd1／Gp78相互作用

3．1．9 Aida促进Gpat3-Hrd1的相互作用

3．1．1 0 Aida促进Hrd1对Gpat3的降解

3．1．1 1 Aida调控脂肪储存的模式图

3．2 讨论

参考文献

图表索引

致谢