依达拉奉预处理对谷氨酸损伤大鼠大脑皮层脑片的保护机制研究

摘要

目的：探讨依达拉奉（Eda）预处理对谷氨酸（Glu）损伤后新生大鼠大脑皮层脑片的神经保护机制。方法：采用新生大鼠大脑皮层脑片的Glu模型，大脑皮层脑片离体培养第三天后被随机分成三组：Eda预处理组、Glu组、对照组，每组12例。Eda预处理组脑片给予含有100μmol/L Eda的培养基孵育24h，换成含1mmol/L Glu的培养基作用30min；Glu组脑片直接给予含1mmol/L Glu的培养基作用30min；对照组用正常培养基培养。Glu作用后1h检测乳酸脱氢酶（LDH）释放率反应脑片损伤情况，用2,3,5—三苯基四氮唑(TTC)染色法定量反应脑片活性（A490值），Glu作用后换成正常培养基，继续孵育72h后行甲苯胺蓝染色观察神经元数量，免疫组织化学方法观察胶质纤维酸性蛋白（GFAP）和半胱天冬酶3(caspase-3)蛋白阳性表达的细胞。结果：1.与对照组相比，Glu组皮层脑片LDH释放率增加（P<0.01）,TTC染色 A490值降低（P<0.01），神经元数量减少，GFAP阳性细胞数量增多（P<0.01），caspase-3阳性细胞增加了194.85％；2.与Glu组比较时，Eda预处理组皮层脑片LDH释放率降低（P<0.01）,TTC染色A490值增加（P<0.01），神经元数量增多，GFAP阳性细胞数量减少（P<0.01），caspase-3阳性细胞数量减少了144.20%。结论：Eda预处理可减轻Glu损伤后的新生大鼠皮层神经元细胞损伤，可能的神经保护机制与抑制星形胶质细胞（Ast）的GFAP表达和减少新生大鼠大脑皮层细胞的caspase-3蛋白表达有关。

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中文摘要

一 前 言

二 材料与方法

2.1实验动物：

2.2用的主要仪器设备：

2.3试剂及材料

2.4 新生大鼠皮层脑片的制备及脑片的离体培养：

2.5 实验分组及各组处理方法

2.5皮层脑片谷氨酸损伤模型的建立

2.4 TTC染色法测定新生皮层脑片活性

2.5 脑片LDH释放量及释放率的测定

2.6皮层脑片的石蜡切片制备和尼氏体染色：

2.7免疫组织化学法（SP法）检测新生大脑皮层脑片GFAP蛋白和caspase-3蛋白的表达：

2.8 试验流程图

三 统计学处理：

四 结 果

4.1脑片离体培养孵育液中LDH释放量的变化

4.2新生大鼠皮层脑片谷氨酸损伤模型：

4.3 皮层脑片Nissl染色：

4.4依达拉奉预处理对谷氨酸损伤后GFAP阳性细胞数量的影响：

4.5依达拉奉预处理对谷氨酸损伤后大脑皮质细胞caspase-3表达的影响：

五讨论

5.1 新生大鼠大脑皮层脑片离体培养：

5.2 谷氨酸损伤后大鼠皮层神经元细胞结构和功能的变化及依达拉奉预处理对神经元损伤后的影响

5.3谷氨酸损伤后大脑皮层神经元的损伤与细胞caspase-3表达变化的关系，及依达拉奉对caspase-3蛋白表达的影响

5.4谷氨酸损伤后大鼠大脑皮层神经元的损伤与星形胶质细胞活化关系，及依达拉奉预处理对GFAP蛋白表达影响。

3.5缺点与不足

六结论

参考文献

英文摘要

致谢

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综述： 中枢神经系统活化的星形胶质细胞对神经元的作用