苗药头花蓼对Hp感染小鼠Th1/Th2型细胞因子表达水平的影响

摘要

目的：观察苗药头花蓼对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)相关性胃炎小鼠模型的治疗效果，研究体内、外头花蓼对小鼠辅助性T细胞Ⅰ型（Helper T cells，Th1）与Ⅱ型（Helper T cells，Th2）细胞因子的影响，探讨头花蓼治疗Hp相关性胃炎时所发挥的免疫调节机制，为临床治疗Hp相关性胃炎及新药的研发提供实验依据。
　　方法：采用琼脂稀释法检测头花蓼对Hp小鼠适应株SS2000的最低抑菌浓度(Minimal inhibitory concentrations，MIC)。分离小鼠脾脏淋巴细胞，与不同浓度头花蓼（1μg/mL、2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL、32μg/mL、64μg/mL、128μg/mL、256μg/mL、512μg/mL、1024μg/mL）共同培养，以0μg/mL为对照，采用CCK-8细胞活性检测试剂盒（Cell Counting Kit-8，CCK-8)检测头花蓼对淋巴细胞的体外增殖情况，用ELISA方法检测不同浓度头花蓼对体外培养淋巴细胞活化、分化过程中Thl及Th2型细胞因子细胞因子γ干扰素（interferon-γ，IFN-γ）和白介素4（interleukin-4，IL-4）水平的影响。采用灌胃接种法复制Hp感染C57BL/6小鼠的Hp相关性胃炎模型，同时设空白对照，模型复制成功后，将模型组小鼠分为头花蓼及头花蓼联合阿莫西林的高、中、低浓度组，模型对照组和药物对照组(阿莫西林、克拉霉素和奥美拉唑三联药物)，各组以相应药物连续灌胃治疗14d，空白对照组和模型组以无菌生理盐水治疗，停药后第28d用ELISA方法检测各组小鼠血清IFN-γ和IL-4含量，取胃粘膜组织做组织病理学检查、Hp培养以及荧光定量检测胃粘膜IFN-γ和IL-4mRNA转录水平变化。
　　结果：1.苗药头花蓼对SS2000的MIC为4mg/mL，其对Hp的抗菌作用与药物浓度成正比。2．体外淋巴细胞培养：头花蓼在＜128μg/mL时，体外对小鼠脾脏淋巴细胞增殖没有明显的影响，≥128μg/mL浓度时，淋巴细胞数量开始明显减少。头花蓼＜64μg/mL浓度作用于经刀豆蛋白 A(ConcaoavahnA，ConA)活化的淋巴细胞72h后可提高 IFN-γ的分泌，并呈剂量依赖性；头花蓼8－128μg/mL浓度范围内具有刺激淋巴细胞分泌IL-4的作用。3.小鼠感染Hp第8周，模型组小鼠胃粘膜 Hp定量培养可达107CFU Hp/g，胃粘膜组织炎症评分可达2.588+0.463，Hp相关性胃炎动物模型复制成功。4.三联药物组和头花蓼高剂量组治疗 Hp感染小鼠后炎症程度显著降低，炎症评分分别为1.356+0.316和1.725+0.33，与模型组小鼠比较有显著性意义（P＜0.05），头花蓼中、低剂量组和头花蓼联合阿莫西林各剂量组小鼠胃粘膜炎症程度与模型组没有明显差异。5.与空白组小鼠比较，模型组小鼠血清 IFN-γ显著增高，三联组和头花蓼高剂量组小鼠 IFN-γ明显降低，有显著性差异(P＜0.05)；中西药联合各个剂量组没有明显变化。Hp感染后及各治疗组小鼠血清IL-4没有显著性变化。6. Hp感染小鼠胃粘膜IFN-γ转录水平上调9倍，IL-4转录水平下调7.7倍。头花蓼高中剂量组和三联组小鼠胃粘膜IFN-γmRNA的转录水平分别下调6.7倍、3.7倍和6.3倍，与模型组比较有显著性差异（P＜0.05）。与模型组比较，三联组和头花蓼高剂量组小鼠胃粘膜IL-4转录水平分别上调4倍和4.8倍，中剂量组和低剂量组也显著上调，与模型组比较有统计学意义（P＜0.05）。
　　结论：
　　1.头花蓼对HpSS2000具有明显的抑菌效果，其MIC为4mg/mL，且抑菌活力与药物浓度成正比。
　　2.头花蓼在体外具有刺激ConA活化的淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-4的能力，且刺激IFN-γ的能力与头花蓼浓度有关。
　　3.头花蓼高剂量组具有明显改善Hp相关性胃炎的能力。
　　4. Hp感染时小鼠全身免疫反应及胃粘膜局部反应发生 Th1应答优势，Hp感染后胃粘膜的炎症反应性损伤可能与Th1产生过量IFN-γ有关。
　　5.头花蓼的抗炎作用可能与下调外周血 IFN-γ水平，调节胃粘膜 IFN-γ和IL-4mRNA转录水平有关。
　　6.头花蓼对于免疫系统可能具有双向调节作用。

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