海洛因依赖死者额叶及大鼠额叶和海马CA1区形态学改变及机制研究

摘要

目的:通过检测海洛因依赖死者额叶及大鼠额叶和海马CA1区脑组织形态学改变,研究泛素蛋白酶体系及神经元易聚蛋白(Tau蛋白、α-Synuclein)在脑组织中的表达,探讨海洛因对中枢神经系统功能和形态的影响及其发生机制。
　　方法:选择SD大鼠30只,体重200-220g,分为3组(短时组2w、长时组4w及正常对照组),每组10只,雌雄各半;首日每次皮下注射海洛因3mg/kg,每天2次,逐日按3mg/kg递增海洛因注射量,连续9天(第9天每次剂量达27mg/kg),第10天用5.0mg/kg纳洛酮腹腔注射,诱发戒断症状,对海洛因成瘾大鼠模型戒断症状进行评分;对照组按同样方式注射等量生理盐水。同时收集贵阳医学院法医司法鉴定中心受理的海洛因吸毒死者20例,按吸毒时间长短分为2组(5年以下短时组、5年以上长时组),以及交通事故致非颅脑损伤死亡10例为对照;对人及试验大鼠脑组织进行HE染色、Bodian银染色、尼氏染色,光镜下观察脑组织形态学改变;采用免疫组织化学方法分别检测Ub、UbE1、Tau蛋白、α-Synuclein在神经元中的表达变化。
　　结果:与对照组相比,吸毒人群额叶及试验大鼠组额叶、海马CA1区均出现神经元数量减少、神经元变性(包括神经元固缩、深染、偏位,细胞核仁消失,尼氏小体溶解,神经原纤维缠结)、嗜神经现象等形态学改变,且吸毒时间长者更明显。Ub和UbE1主要表达在神经元细胞核、细胞质内,细胞外未见表达。Tau蛋白主要表达在神经元细胞质及轴突上。α-Synuclein蛋白主要集中在神经元核周胞质及神经元突触终末。图像分析显示Ub、Tau蛋白、α-Synuclein的表达量为海洛因长时依赖组(5年以上人组、4w大鼠组)>海洛因短时依赖组(5年以下人组、2w大鼠组)>非海洛因依赖组,差别具有统计学意义(P<0.05);UbE1的表达量为海洛因长时依赖组(5年以上人组、4w大鼠组)<海洛因短时依赖组(5年以下人组、2w大鼠组)<非海洛因依赖组,差别具有统计学意义(P<0.05)。
　　结论:海洛因中毒可引起脑组织形态学改变,表现为神经元数量减少、神经元变性等,其机制可能与泛素蛋白酶体系受损和神经元内易聚蛋白聚集有关,且随用药时间的延长脑损害越重。

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中文摘要

前 言

材料和方法

1 实验材料

1.1 实验对象

1.2 实验动物

1.3 实验试剂

1.4 实验主要设备仪器：

2 实验方法

2.1 动物模型复制

2.2 海洛因依赖人脑标本采集

2.3 常规苏木素-伊红染色（Hematoxylin-eosin,HE）

2.4 Bodian银染色步骤：

2.5 尼氏染色步骤

2.6 免疫组化法检测Ub、UbE1、Tau蛋白、α-Synuclein蛋白在脑组织中表达（Envision二步法）：

2.7 统计学分析

3 结果

3.1 海洛因依赖戒断大鼠模型评分结果

3.2 大鼠体重

3.3 大鼠脑组织病理形态学观察

3.4 大鼠脑组织中Ub、UbE1、Tau蛋白、α-Synuclein蛋白的表达水平（免疫组织化学）

3.5 人脑额叶组织HE染色检查

3.6 人脑额叶组织银染、尼氏染色

3.7 人脑额叶免疫组织化学

讨 论

结 论

参考文献

英文摘要

致谢

略缩词表：

声明

附：综述