Ursolic acid促K562/IM对伊马替尼的敏感性的观察及其机制初探

摘要

目的：本文旨在探讨熊果酸（Ursolic acid；UA）增强慢性髓系白血病（chronic myelogenous leukemia;CML）耐伊马替尼（Imatinib，IM）细胞株K562/IM对伊马替尼的敏感性及其分子机制研究，为临床上克服CML耐药提供新的理论基础。
　　方法：培养K562/IM细胞，分别用IM，UA，和两药联用处理细胞。MTT检测细胞增殖抑制率；流式细胞术检测药物诱导细胞凋亡的情况；RT-PCR及Western Blot检测耐药相关基因及Nrf-2/Keap-1/HO-1途径mRNA及蛋白水平的变化。Fish检测细胞中 Bcr-Abl融合基因的改变。在体内实验中，构建 K562/IM裸鼠肿瘤模型，皮下注射肿瘤细胞一周后，分别给予各组小鼠生理盐水，伊马替尼，UA+IM，观察并记录裸鼠肿瘤生长大小及裸鼠中位生存时间。
　　结果：IM与UA联合处理细胞24小时后，对K562/IM的增殖抑制率明显低于K562细胞，联合用药增殖抑制率高于单药组；同样，联合用药处理细胞24，48小时后，凋亡率显著提高（p<0.05）。RT-PCR及Western Blot结果显示UA处理细胞后，耐药相关蛋白MDR1及GST-π的表达下调，BCR/ABL融合基因表达降低；不同浓度的UA处理K562/IM细胞后，Nrf-2，HO-1表达下调，Keap-1上调，并呈一定的浓度依赖性；用HO-1抑制剂Znpp IX联合UA处理细胞，Nrf-2，HO-1表达下调，Keap-1上调，诱导剂Hemin联合UA联合处理K562/IM细胞，Nrf-2，HO-1表达与单用Hemin相比表达无明显升高，Keap-1表达较低（P<0.05），FISH检测结果显示：抑制Nrf-2/Keap-1/HO-1途径可伴随BCR/ABL表达的降低。体内实验结果显示伊马替尼联合 UA作用后，K562/IM肿瘤的体积明显小于单药组，且中位生存期明显长于单药组。1
　　结论：研究表明UA在体外能够通过抑制Nrf-2/Keap-1/HO-1途径增强K562/IM细胞对伊马替尼的敏感性，从而下调 BCR/ABL的表达，同时伴随着耐药相关蛋白MDR-1和GST-π的下降，发生耐药逆转。在体内实验中，伊马替尼联合UA能够显著抑制Nude裸鼠肿瘤的生长，并显著延长荷瘤小鼠的中位生存时间。

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附 综述:HO-1基因在慢性髓系白血病耐药中的作用