血清抗端粒酶逆转录酶(hTERT)自身抗体作为肿瘤标志物的初步研究

摘要

目的：通过构建人端粒酶逆转录酶N-端（hTERT-n）蛋白原核表达系统，并分离提纯获得高纯度的hTERT-n蛋白，以该蛋白为抗原利用间接ELISA技术检测癌症患者、良性疾病患者和正常热血清中抗hTERT自身抗体水平，为血清抗hTERT自身抗体能否作为一种新的肿瘤标志物提供实验依据。
　　方法：1.重组质粒pMAL-p5X-hTERT-n和质粒载体pMAL-c5X经限制性内切酶BamHⅠ和NdeⅠ双酶切，电泳分离后，切胶回收质粒载体和目的基因，用T4 DNA连接酶连接；2.连接产物转化克隆菌株NEB10-β感受态细胞，提取重组质粒进行酶切和测序验证；3.重组质粒pMAL-c5X-hTERT-n转化表达菌株TB1大肠杆菌感受态细胞，经0.3 mmol/L IPTG诱导目的蛋白表达，12％SDS-PAGE初步验证目的蛋白表达情况；4.重组表达菌TB1扩大培养，IPTG诱导目的蛋白表达，用直链淀粉树脂层析柱和BioLogic DuoFlow蛋白纯化仪提纯目的蛋白，经SDS-PAGE、Western blo、考马斯亮蓝染料结合法鉴定蛋白大小和测定蛋白质浓度。5.间接ELISA法检测239例肺癌、215例乳腺癌、123例直肠癌、122例结肠癌、105例肺炎患者和120例正常人血清抗hTERT-n自身抗体的水平，检测结果进行统计分析。
　　结果：①成功构建 pMAL-c5X-hTERT-n-TB1原核表达菌②成功获得高纯度重组hTERT-n蛋白，浓度为1.0 mg/mL；③间接ELISA法检测血清抗hTERT-n自身抗体结果发现：正常对照组、肺炎组和肺癌组血清抗hTERT-n自身抗体测定浓度（X±SE）分别为4.67±0.19、5.86±0.28和6.95±0.20；肺癌组和肺炎组高于健康对照组（P<0.05），肺癌组与肺炎组差有统计学意义（P＜0.05）；乳腺癌、直肠癌、结肠癌组血清抗hTERT-n自身抗体测定浓度（X±SE）分别为6.53±0.21、7.47±0.31和6.76±0.27；后三组与正常组比较差别有统计学意义（P<0.05），与肺炎组差别有统计学意义（P小于0.05）。
　　结论：癌症组患者血清抗 hTERT-c自身抗体水平与良性疾病组患者差别无统计学意义，提示血清抗hTERT-c自身抗体不能做为一项新的肿瘤标志物。

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中文摘要

前言

材料与方法

1 研究对象

2 主要试剂和材料

3 主要仪器

4 实验方法

3.讨论：

4. 结论

致谢

英文摘要

略缩词表

参考文献