伤寒和甲型副伤寒沙门菌L型的体外胆汁诱导及其感染胆囊的病原学诊断

摘要

目的：研究人胆汁对伤寒及甲型副伤寒沙门菌L型的诱导作用，探讨胆囊携带伤寒和甲型副伤寒沙门菌 L型的流行病学意义及其感染的病原学诊断方法。
　　方法：将伤寒和甲型副伤寒沙门菌分别接种无菌的人胆汁内，置37℃培养。分别在不同时间段，以常规细菌学方法分离伤寒、副伤寒沙门菌，同时以非高渗分离培养法分离L型并传代培养获得稳定 L型，观察胆汁诱导的伤寒、副伤寒沙门菌L型的形态、革兰染色性及细胞壁染色，检测伤寒、副伤寒沙门菌L型的生化反应活性。采用伤寒和副伤寒沙门菌特异性基因fliC-d、filC-a、invA，以多重聚合酶链式反应、琼脂糖凝胶电泳及核苷酸序列测定方法，鉴定伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌L型。
　　结果：胆汁诱导伤寒沙门菌48小时、甲型副伤寒沙门菌6小时之后，诱导物经常规细菌学方法分离培养未检出细菌型。经胆汁培养1小时至45天，在不同时间间隔进行非高渗培养基分离培养，可持续检出细菌L型。伤寒和甲型副伤寒沙门菌 L型细胞均为圆球或近似圆球的形态，多以单个、成双、成堆排列；革兰染色、细胞壁染色阴性，生化反应阴性。多重PCR扩增产物显示，伤寒以及甲型副伤寒稳定 L型分别具有同其亲代细菌型一致的fliC-d、fliC-a和invA基因核苷酸片段，伤寒沙门菌L型凝胶电泳条带分别为750bp和284bp；甲型副伤寒沙门菌L型凝胶电泳条带分别为329bp和284bp，核酸序列测定结果显示，伤寒沙门菌和甲型副伤寒沙门菌L型的fliC-d、fliC-a和 invA基因核苷酸序列组成与其亲代细菌型的相似率为99％。
　　结论：根据本文研究结果，我们获得以下结论：1、伤寒和甲型副伤寒沙门菌在人胆汁内可迅速丧失细胞壁和成为L型，造成胆汁中伤寒和甲型副伤寒的常规细菌学分离培养阴性。2、伤寒和甲型副伤寒沙门菌 L型可在人胆汁内较长时间携带，使之成为潜在的病原菌，可能与慢性胆囊炎和胆囊结石的发生和发展有关，具有重要的流行病学意义。3、胆汁诱导的伤寒和甲型副伤寒L型可用非高渗分离培养法分离培养，分离的L型可用伤寒及甲型副伤寒的特异性基因进行多重PCR扩增技术检测与鉴定。

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附：综述 伤寒和甲型副伤寒沙门菌及其L型感染与人类胆囊疾病关系的研究进展