微囊藻毒素促肝癌过程中p53、p21基因表达改变及其相关机理研究

摘要

[目的] 研究微囊藻毒素(MC-LR)促肝癌过程中癌前病变组织p53、p21基因mRNA表达水平的变化以及癌前病变组织p53基因突变情况，为阐明微囊藻毒素致肝癌的分子机理提供依据。 [方法] 1.微囊藻毒素促肝癌过程中p53、p21waf1mRNA表达水平的变化1.1建立二阶段肝癌动物模型：以DEN作启动剂，MC-LR作促癌剂，并设立空白对照组和DEN对照组。 1.2微囊藻毒素促肝癌过程中p53、p21基因mRNA表达水平的变化：RT-PCR内标法。取肝癌前病变组织100mg提取RNA，逆转录成cDNA，采用25μl体系扩增p53、p21基因mRNA，琼脂糖凝胶电泳后在凝胶成像系统下拍照，用Image-ProPlus图像分析软件对目的基因及内参物(GADPH)电泳条带进行积分光密度(integralopticaldensity,IOD)测定，以目的基因与内参的积分光密度比值，作为半定量资料进行统计分析。 2.PCR-SSCP银染法检测肝癌前病变组织p53基因的点突变 DNA提取试剂盒提取实验大鼠肝癌前病变组织DNA，对p53基因高度保守区(第5、6、7、8外显子)进行PCR，取扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染检测点突变，并进行统计分析。 [结果] 1.微囊藻毒素(MC-LR)促肝癌过程中癌前病变组织p53基因mRNA表达情况：空白对照组p53mRNA与内参的积分光密度比值是0.9552±0.6635，DEN对照组p53mRNA与内参的积分光密度比值是1.3696±0.6149，MC-LR促癌组p53mRNA与内参的积分光密度比值是2.5719±1.3202，与空白对照组、DEN对照组相比，MC-LR促癌组癌前病变组织中p53mRNA的表达水平显著升高(P＜0.05)。 2.微囊藻毒素(MC-LR)促肝癌过程中癌前病变组织p21基因mRNA表达情况：空白对照组p21mRNA与内参的积分光密度比值是1.8461±0.2081，DEN对照组p21mRNA与内参的积分光密度比值是1.7736±0.5391,MC-LR促癌组p21mRNA与内参的积分光密度比值是1.8954±0.8142，与空白对照组、DEN对照组相比，MC-LR促癌组癌前病变组织中p21mRNA的表达水平没有显著性差别(P＞0.05)。 3.p53基因第5，6和7外显子单链条带未发现泳动变位，而在第8外显子条带出现变异，提示p53基因第8外显子有突变发生。与空白对照组的条带相比，14例MC-LR促癌组P53第8外显子突变率为28.6％(4例).DEN对照组未见突变。 [结论] 1.在微囊藻毒素(MC-LR)促肝癌过程中，MC-LR诱导了p53基因mRNA表达水平增加。 2.在MC-LR促肝癌过程中，p53基因第8外显子发生突变。MC-LR引起p53基因突变可能是其致肝癌或促肝癌的分子机制之一。

目录

英文缩略词一览表

前 言

第一部分 微囊藻毒素促肝癌过程中p53、p21waflmRNA表水平的变化

第二部分 PCR-SSCP法检测微囊藻毒素促肝癌过程中p53基因点突变

讨论

结 论

参考文献

致谢

[综述]微囊藻毒素的肝毒性作用研究进展