重组人肿瘤坏死因子-α对HL-60细胞及其裸鼠异种移植瘤的作用研究

摘要

肿瘤坏死因子-α(tumornecrosisfactor-alpha,TNF-α)是一种多效应的细胞因子，具有抗肿瘤、抗感染和调节机体免疫等功能，其抗肿瘤作用一直备受关注，它是用以肿瘤生物治疗的第一个细胞因子。有关TNF-α的抗肿瘤作用侧重于对软组织肉瘤、黑色素瘤、肝癌、肺癌、鼻咽癌、喉癌等，而对白血病的作用研究较少。我们前期研究发现在三氧化二砷(As2O3)诱导HL-60细胞凋亡过程中伴有内源性TNF-α表达增强，而TNF-α反义硫代磷酸寡脱氧核苷酸能够抑制As2O3诱导瑚HL-60细胞凋亡，提示内源性1NF-α在HL-60细胞凋亡过程中起驱动作用。有关外源性TNF-α在体外诱导白血病细胞凋亡的作用已有文献报道，但尚未见以白血病细胞裸鼠移植瘤为模型来研究其体内抗白血病作用的报道。本实验采用重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)，研究其在体外对HL-60细胞的作用，进一步通过HL-60细胞裸鼠移植瘤模型，研究其在体内对HL-60细胞裸鼠移植瘤的作用。 本文的研究内容主要包括： 1．rhTNF-α体外对HL-60细胞作用的研究：应用MTT比色法、集落形成试验等检测不同浓度rhTNF-α对HL-60细胞增殖能力的影响；应用AO/EB复合染色、流式细胞术和TdT酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法等检测而rhTNF-α对HL-60细胞凋亡的诱导作用。 2．rhTNF-α对HL-60细胞裸鼠异种移植瘤作用的研究：使用本研究所传代提供的高致瘤性HL-60细胞株，建立HL-60细胞裸鼠异种移植瘤模型。实验设生理盐水对照组和高、中、低三个浓度rhTNF-α给药组，每组7只裸鼠。给药方式为瘤内注射。高、中、低浓度给药组分别按每只瘤内注射而rhTNF-α2．0×1O4U/0.2mL、1.O×104U/0.2mL、O.5×1O4U/0.2mL进行给药，对照组注射等量生理盐水，每天给药一次，连续7天。末次给药后24小时，处死裸鼠。称量离体瘤块重量、计算抑瘤率，一对瘤组织进行病理学检查等检测rhTNF-α对HL-60细胞裸鼠异种移植瘤生长的影响；采用透射电镜以及TUNEL等方法检测rhTNF-α对HL-60细胞裸鼠移植瘤组织细胞凋亡的诱导作用。 取得了以下主要结果： 1．rhTNF-α对HL-60细胞的增殖具有明显的抑制作用：MTT比色法、集落形成试验均显示400U/mL的rhTNF-α能明显抑制HL-60细胞增殖，且随着药物浓度的升高、作用时间的延长该抑制作用明显增强，呈量效及时效关系。 2．rhTNF-α可诱导HL-60细胞凋亡：AO/EB染色可见800～3200U/mL的rhTNF-α作用HL-60细胞48h，HL-60细胞核内染色质浓缩聚集或成碎片，呈现凋亡表象；流式细胞术检测显示，随着rhTNF-α浓度的增加，细胞凋亡性率逐渐增高；TUNEL法检测3200U/mLrhTNF-α作用HL-60细胞48小时，凋亡阳性率可达37．5％。上述结果提示rhTNF-α可诱导HL-60细胞凋亡。 3．出1NF-α可抑制HL-60细胞裸鼠异种移植瘤的生长：瘤内注射rhTNF-α1．O×104U和2．0×10‘U时，rhTNF-α对HL-60细胞裸鼠异种移植瘤的抑制率分别为55.2l％(p<0.05)和60．33％(p<0.01)，但采用低浓度(O．5×10‘U)时，其对移植瘤的抑制率仅为17．36％(p>0.05)，说明实验中高、中浓度rhTNF-α对HL-60细胞裸鼠异种移植瘤的生长具有抑制作用，低浓度而rhTNF-α对HL-60细胞裸鼠异种移植瘤的生长则无抑制作用；病理学检查发现rhTNF-α处理组瘤组织中瘤细胞数目减少，捧列相对疏松，并有程度不等的出血坏死区域；透射电镜及TUNEL法检测而rhTNF-α处理组瘤组织中可见较多凋亡细胞。 结论： 1.rhTNF-α可抑制体外培养的人麓系白血病细胞株HL-60细胞的增殖并诱导其凋亡； 2．rhTNF-α可抑制HL-60细胞裸鼠异种移植瘤的生长，并诱导瘤组织中HL-60细胞凋亡。

目录

前 言

第一部分重组人肿瘤坏死因子-α体外对HL-60细胞作用的研究：材料与方法

第一部分重组人肿瘤坏死因子-α体外对HL-60细胞作用的研究：结果

第一部分重组人肿瘤坏死因子-α体外对HL-60细胞作用的研究：讨论

第二部分重组人肿瘤坏死因子-α对HL-60细胞裸鼠异种移植瘤作用的研究：材料与方法

第二部分重组人肿瘤坏死因子-α对HL-60细胞裸鼠异种移植瘤作用的研究：结果

第二部分重组人肿瘤坏死因子-α对HL-60细胞裸鼠异种移植瘤作用的研究：讨论

结 论

参考文献

综述 肿瘤坏死因子与肿瘤

致 谢