松果体及其褪黑素对大鼠胸腺上皮细胞IL-7表达的影响

摘要

目的 通过研究松果体摘除和补充褪黑素，以及体外褪黑素干预对大鼠胸腺上皮细胞表达IL-7的影响，探索松果体褪黑素影响胸腺细胞分化发育的机制，进一步揭示松果体褪黑素与胸腺的关系，从而丰富人类对神经-内分泌-免疫网络的认识。 方法 ①消化法原代培养大鼠胸腺基质细胞，差数贴壁和差别消化法纯化出胸腺上皮细胞，应用广谱角蛋白抗体做免疫细胞化学染色进行鉴定； ②运用MTT法观察褪黑素干预对体外培养胸腺上皮细胞生长的影响，半定量RT-PCR法观察胸腺上皮细胞经褪黑素干预后IL-7mRNA表达的变化； ③建立松果体摘除动物模型：选用2月龄雄性清洁级SD大鼠110只，分为正常对照组、假手术对照组、松果体摘除组、松果体摘除+褪黑素腹腔注射7．5mg·kg-1·day-1组和松果体摘除+褪黑素腹腔注射15mg．kg-1·day-1组，松果体摘除组动物腹腔注射等量生理盐水，术后4、8周取材。 ④运用免疫组织化学法和半定量RT-PCR法观察松果体摘除及补充褪黑素后，大鼠胸腺上皮细胞IL-7表达的变化。 结果 ①体外培养和纯化的胸腺基质细胞经鉴定证明90％以上为胸腺上皮细胞； ②褪黑素干预对大鼠胸腺上皮细胞的生长没有显著影响，但能使IL-7mRNA的表达水平明显升高，且呈剂量依赖性； ③松果体摘除后大鼠胸腺IL-7免疫组化和RT-PCR的结果与假手术对照组相比无显著差别； ④与对照组相比，松果体摘除大鼠补充高剂量褪黑素4W后，免疫组化结果显示胸腺IL-7阳性面积增加、平均灰度下降，RT-PCR结果显示mRNA水平显著增高，但8W后均下降至正常水平。 结论 培养大鼠胸腺上皮细胞经褪黑素干预后IL-7的表达水平呈剂量依赖性升高。松果体摘除对大鼠胸腺IL一7的表达没有影响，但补充大剂量外源性褪黑素后在一定时间内能使IL一7的表达显著增高，长时间作用则其作用逐渐消失。

目录

前言

第一部分褪黑素对体外培养大鼠TEC表达IL-7的影响

第二部分松果体摘除及补充褪黑素对大鼠胸腺TEC表达IL-7的影响

结论

参考文献

综述胸腺上皮细胞与神经-内分泌-免疫网络

致谢