I-TAC在神经退行性病变中免疫调节作用的体外研究

摘要

目的:用体外实验研究CXC家族趋化因子I-TAC在小胶质细胞上的表达及其影响因素，同时观察I-TAC对原代T细胞的增殖、分化、黏附分子表达及趋化作用的影响，从而探讨I-TAC在神经系统退行性变中可能发挥的免疫调节作用。 方法:用LPS刺激小鼠小胶质细胞株N9，分别加入A β 42、TNF-α、DEX以及特异性 TLR4抗体，采用RT-PCR半定量分析检测I-TAC mRNA的表达，应用流式细胞术检测TLR2、TLR4在N9表面的表达。用尼龙毛分离纯化小鼠原代T细胞，加I-TAC培养，用ELISA检测培养上清中的IFN-Y和IL-4浓度。采用微孔隔离室迁移实验观察I-TAC对T细胞的趋化作用。原代T细胞及N9细胞在I-TAC刺激下的增殖实验采用MTT法。应用流式细胞术检测黏附分子CDlla在T细胞表面的表达。 结果: 1、LPS与Aβ 42均能诱导的N9细胞表达I-TAC mRNA；TNF-α能显著增加LPS诱导的I-TAC mRNA表达，DEX则降低其表达。 2、N9细胞在LPS刺激前后均可表达TLR2及TLR4膜分子。在细胞培养中加入抗-TLR4抗体，I-TAC的表达量显著降低。 3、重组I-TAC对小鼠T细胞产生Th1型细胞因子IFN-γ的增加占显著优势。在趋化实验中T细胞的迁移指数的增加呈I-TAC剂量依赖性，I-TAC浓度在200 ng/ml时迁移指数达4.964±1.398。在T细胞增殖实验中，与对照组相比，I-TAC使OD值显著增高；但在N9细胞增殖实验中I-TAC却使OD值显著下降。流式细胞技术检测显示I-TAC以剂量依赖的形式显著增加CDlla(LAF-1)阳性T细胞的百分比。 结论: 1、LPS、TNF-α、Aβ42能够诱导N9细胞表达I-TAC mRNA，其中TNF-α对 LPS的诱导作用具有协同效应，而DEX则具有拮抗效应。 2、LPS促进N9细胞表面表达TLR2、TLR4。TLR4介导的信号传导可能是I-TAC表达的重要依赖因素。 3、I-TAC能促进T细胞趋化、增殖、表达黏附分子及向Th1方向分化。

目录

论文说明:英文缩略语

声明

引言

第一部分I-TAC在小胶质细胞上的表达

材料与方法

结果

第一部分讨论

小结

第二部分I-TAC对T细胞免疫调节作用的初步探讨

材料与方法

结果

第二部分讨论

小结

参考文献

结论

致谢

综述