家族性急性髓系白血病相关新基因的SNP基因芯片筛选及其FAMLF新基因表达分析与真核表达系统的建立

摘要

白血病是血液系统最常见的恶性肿瘤，白血病的发生发展与相关基因结构及功能的异常密切相关，探讨白血病高发家系特异性新基因变化与白血病发生发展的关系，有助于为白血病的特异性诊断与基因治疗提供有价值的科学根据。 目的： 1.筛选、克隆出家族性急性髓系白血病致病相关基因，在分子水平上探讨家族性急性髓系白血病发生、发展的机制。 2.在前期研究的基础上构建FAMLF蛋白真核表达系统，为今后进一步研究其蛋白质的结构及功能研究奠定基础。 方法: 1.采用定位克隆策略，应用目前最先进的500KSNP基因芯片对一个急性白血病高发家系里的患者、高危个体、正常同胞和非血缘亲属进行全基因组基因分型。 2.应用生物信息学分析等技术，结合相应的遗传学统计分析软件进行连锁分析、单倍型作图、拷贝数分析，定位出致病基因所在染色体区域。 3.确定目标染色体区域内的候选基因。 4.结合RT-PCR检测、筛选鉴定出在候选染色体区域内表达水平异常的致病相关新基因。 5.用RT-PCR检测FAMLF在家系内外正常人、患者mRNA水平的表达情况。 结果: 1.获得8位家系成员的全基因组的基因分型结果。 2.对基因分型结果进行连锁分析与单倍型作图，获得了LOD值≥1.5并单倍型共享的SNP对应的基因共有21条。 3.对基因分型结果进行拷贝数分析，获得拷贝数增加或减少SNP对应的基因共56条。 4.对于拷贝数异常的SNP所对应的基因进行RT-PCR验证，获得结果与拷贝数分析的结果相一致。 5.在23例急性髓系白血病患者与77例正常健康人对照实验中，FAMLF在急性髓系白血病病人中高表达，而在正常对照组低表达，该基因在77例正常人之中的表达是近似呈负偏态分布。 6.成功地构建出FAMLF基因毕赤酵母真核表达系统并表达出FAMLF蛋白质。 结论: 1.成功获得该家系连锁LOD≥1.5及单倍型共享的基因。 2.成功获得该家系患者拷贝数异常的基因。 3.SNP基因芯片技术是孟德尔遗传疾病致病基因定位的有效方法之一。 4.SNP拷贝数分析可以发现拷贝数异常的基因。 5.FAMLF在大部分急性髓系白血病病人中高表达，在正常人中低表达。 6.成功地构建出FAMLF真核表达系统并表达出FAMLF蛋白。

目录

声明

前 言

第一部份家族性急性髓系白血病相关新基因的SNP基因芯片筛选

材料与方法

结 果

讨论

结 论

第二部份家族性急性髓系白血病相关新基因(FAMLF)表达分析及真核表达系统的建立

材料与方法

结 果

讨 论

结 论

参考文献

致 谢

综 述基因芯片在人类疾病相关新基因克隆中应用的进展