OK-432联合肿瘤冻融抗原诱导的树突状细胞瘤苗对小鼠前胃癌的抑瘤作用

摘要

目的: 本课题旨在应用OK-432联合肿瘤冻融抗原诱导小鼠骨髓单核细胞来源的树突状细胞(dendritic cells，DCs)制备抗小鼠前胃癌瘤苗，观察该疫苗对小鼠前胃癌的体内抑瘤作用，探讨该方法制备的瘤苗在胃癌免疫治疗中的应用价值，为以后应用于临床抗胃癌治疗打下基础。 方法： 利用贴壁粘附法分离小鼠骨髓单核细胞，并在含10％胎牛血清(FCS)、重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CFS)、重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)的培养体系中诱导培养，以共孵育方式将小鼠前胃癌冻融抗原负载于DCs，并应用OK-432作为DCs的成熟刺激因子，体外控制DCs充分成熟，制备抗胃癌DCs瘤苗，光镜和透射电镜下观察细胞形态，流式细胞仪检测细胞表面抗原CD83和CD86的表达情况，并将瘤苗从荷瘤小鼠尾静脉内注入，观察其对小鼠前胃癌的免疫治疗效果。 结果: 1小鼠骨髓单核细胞在含10％FCS、rmGM-CFS和rmIL-4的培养体系中培养至第七天即分化成为表型、形态正常的未成熟DCs(Immature DCs，imDCs)。 2肿瘤冻融抗原组和OK-432联合肿瘤冻融抗原组的DCs表面抗原CD83和CD86表达均比未刺激组明显上调(P<0.01)，电镜下具备典型的成熟DCs形态特征；OK-432联合肿瘤冻融抗原组DCs的CD83和CD86表达均高于肿瘤冻融抗原组(P<0.05)，细胞形态更为成熟。 3经肿瘤冻融抗原负载后的DCs瘤苗和经OK-432联合肿瘤冻融抗原冲击的DCs瘤苗能明显延缓荷瘤小鼠前胃癌细胞的生长，抑瘤率明显高于未刺激组(P<0.01)；OK-432联合肿瘤冻融抗原组体内抑瘤作用高于肿瘤冻融抗原组(P<0.05)。 结论: 1.OK-432和/或肿瘤冻融抗原能诱导小鼠骨髓来源的imDCs分化为成熟的DCs,OK-432和肿瘤冻融抗原联合应用促成熟效果更好，该肿瘤疫苗制备方法具有方法简单、成本较低、培养时间短和抗肿瘤活性高等优点，也为制备其他类型肿瘤DCs瘤苗提供实验依据。 2静脉注射上述DCs瘤苗可明显抑制荷瘤小鼠前胃癌的生长，该肿瘤免疫治疗方案具有临床应用参考价值。

目录

声明

前言

第一部分树突状细胞瘤苗的制备及其形态学鉴定

第二部分树突状细胞瘤苗表型的鉴定

第三部分树突状细胞瘤苗对前胃癌荷瘤小鼠疗效观察

结论

参考文献

致谢

综述 树突状细胞与胃癌免疫治疗的研究进展