牙周韧带细胞与骨髓基质细胞促进牙周组织再生能力的比较研究

摘要

目的：比较骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells，BMSCs)和牙周韧带细胞(periodontal ligament cells，PDLCs)促进牙周组织再生的能力，为牙周组织的再生治疗提供依据。
　　 方法：1.体外观察α-MEM、DMEM-LG和RPMI1640三种培养基对Beagle犬BMSCs增殖与分化的影响。2.体外观察脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix，ADM)与BMSCs生物相容性；并将ADM作为成骨诱导后BMSCs的载体，植入裸鼠皮下，单纯的ADM作为对照组，分别于术后4W和8W观察大体标本及组织学情况。3.体外通过实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time fluorescence quantitative polymerase chainreaction,Realtime PCR)、免疫细胞化学染色、Von Kosssa染色等方法比较BMSCs和PDLCs再生组织的能力。4.将雄性裸鼠12只随机分两组，每组6只，于每只皮下植入ADM、BMSCs+ADM、PDLCs+ADM。4W和8W后分别处死一组取标本，常规固定、脱钙、包埋、切片后进行苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、Gomori特殊染色和免疫组化染色，以比较BMSCs和PDLCs再生组织的潜能。
　　 结果：1.α-MEM组24h内贴壁的细胞数目最多；消除贴壁差异后，α-MEM和DMEM促增殖作用相近；α-MEM组碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)表达量最高，但矿化结节形成数目较少，DMEM组矿化结节形成个数最多。2.体外培养观察BMSCs与ADM有良好的生物相容性；实验组4W，ADM部分降解吸收，BMSCs在其中生长良好，出现新生组织，部分出现类骨样结构；8W，ADM大部分吸收，形成大量的新生组织和类骨样结构：单纯ADM组新生组织形成较少，支架材料降解速度与实验组类似。3.Realtime PCR检测结果发现PDLCs中胶原Ⅻ和骨保护素(osteoprotegerin,OPG)表达量都高于BMSCs(P＜0.05)，ALP表达含量在二者之间差异无显著性(P＞0.05)；细胞免疫组化染色显示PDLCs中胶原Ⅻ表达的量高于BMSCs(P＜0.05)，而OPG染色、ALP活性检测及Von Kosssa染色结果都表明BMSCs成骨能力高于PDLCs。4.4W和8W组织学观察和免疫组化染色显示BMSCs形成类骨样结构多于PDLCs，而牙周韧带形成能力仍小于PDLCs。
　　 结论：1.培养基α-MEM促进BMSCs的增殖，但促矿化能力较弱；DMEM-LG培养基促进细胞增殖和分化，较适合BMSCs的培养。2.ADM可为细胞的生长和分化提供理想的三维空间，并具有作为牙周组织工程支架材料的潜力，在组织工程化牙周膜的构建中有良好的应用前景。3.体内外研究表明BMSCs成骨能力高于PDLCs，但其形成牙周韧带的能力低于PDLCs。

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文摘

英文文摘

论文说明:英文缩略词表

声明

前言

第一部分 不同培养基对Beagle犬骨髓基质细胞增殖与分化的影响

第二部分 脱细胞真皮基质和Beagle犬骨髓基质细胞生物相容性研究

第三部分 Beagle犬骨髓基质细胞和牙周韧带细胞体外再生组织能力的比较研究

第四部分 Beagle犬骨髓基质细胞和牙周韧带细胞体内再生组织潜能的比较研究

全文总结

参考文献

综述:脱细胞真皮基质的研究及应用

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