TRAIL影响人肺腺癌紫杉醇耐药细胞株对紫杉醇敏感性的研究

摘要

目的:
　　探索TRAIL干预后人肺腺癌紫杉醇耐药株对紫杉醇敏感性的变化及其可能机制。
　　方法:
　　1.建立并鉴定人肺腺癌紫杉醇耐药株:用含低浓度紫杉醇培养液持续培养人肺腺癌A549细胞株,逐渐增加剂量诱导建立耐药亚株A549/Taxol-R。用RT-PCR方法检测细胞耐药相关基因mRNA的表达,MTT法检测药物半数抑制浓度(IC50),判断细胞对药物敏感性。
　　2.检测TRAIL和紫杉醇干预对A549/Taxol-R体外增殖和凋亡的影响:TRAIL和紫杉醇单独或联合干预A549/Taxol-R后,用MTT法检测药物半数抑制浓度(IC50),流式细胞仪检测细胞凋亡率变化。
　　3.检测TRAIL和紫杉醇干预对A549/Taxol-R凋亡相关基因的表达情况影响:用TRAIL和紫杉醇单独或联合干预后,用WesternBlot检测Caspase-3活性裂解片段表达,用RT-PCR检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2mRNA的表达情况。
　　结果:
　　1.成功诱导培养了人肺腺癌A549细胞的紫杉醇耐药株A549/Taxol-R。相比其亲代细胞,A549/Taxol-R对紫杉醇的敏感性明显降低,同时其MDR1基因呈高表达。
　　2.MTT结果显示:TRAIL和紫杉醇联合使用对A549/Taxol-R细胞的生长抑制率超过两者单独使用(P<0.05),两药具有协同作用。流式细胞细胞仪结果显示:TRAIL和紫杉醇联合使用对A549/Taxol-R细胞的凋亡率超过两者单独使用。
　　3.WesternBlot和RT-PCR显示:TRAIL通过Caspase-3途径诱导A549/Taxol-R凋亡。凋亡相关基因Bax和Bcl-2参与调节其凋亡。
　　结论:
　　1.TRAIL在体外具有提高人肺腺癌A549细胞株的MDR亚株A549/Taxol-R细胞对紫杉醇的敏感性的作用;
　　2.TRAIL可能是通过促进肿瘤细胞凋亡来提高人肺腺癌A549细胞株的MDR亚株A549/Taxol-R细胞对紫杉醇的敏感性,机制与其促进Bax的表达、下调Bcl-2的表达,从而上调caspase-3的表达有关。

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中英文缩略词表

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前言

材料与方法

1 试剂与仪器

1.1 主要试剂

1.2 主要仪器

1.3 主要工作液的配制

2 实验方法

2.1 细胞培养

2.3 MTT法体外检测细胞的增殖抑制作用

2.4 流式细胞仪检测细胞凋亡率

2.5 Western Blot检测TRAIL干预对细胞凋亡相关蛋白表达的影响

2.6 逆转录PCR法鉴定mRNA表达

2.7 统计学分析

实验结果

1 肺癌紫杉醇耐药细胞A549/Taxol-R的表型鉴定

1.1 细胞生长增殖曲线与细胞群体倍增时间测定结果

1.2 A549/Taxol-R细胞对不同药物的敏感程度

1.3 A549/Taxol-R耐药基因MDR1的表达情况

2 紫杉醇和TRAIL联合干预对A549/Taxol-R细胞增殖的影响

3 紫杉醇和TRAIL联合干预对A549/Taxol-R细胞凋亡的影响

4 TRAIL和紫杉醇联合干预促A549/Taxol-R凋亡的机制

4.1 TRAIL和紫杉醇干预对A549/Taxol-R细胞caspase-3表达的影响

4.2 TRAIL和紫杉醇干预对A549/Taxol-R细胞Bax、Bcl-2mRNA表达的影响

讨论

1 肺癌紫杉醇耐药细胞A549/Taxol-R的建立和耐药表型

2 紫杉醇和TRAIL对A549/Taxol-R细胞的体外抗肿瘤作用

3 TRAIL和紫杉醇联合干预诱导A549/Taxol-R凋亡的机制

结论

参考文献

致谢

综述