赤藓糖醇-牛奶混合液对人工龋菌斑生物膜及脱矿釉质影响的体外研究

摘要

目的:
　　赤藓糖醇是一种新型的糖醇类甜味剂,具有低热量、高耐受、无毒副作用、吸湿性低等优点,近年来研究发现其还具有预防龋病的作用。牛奶含有丰富的营养成分,有“白色血液”之称,其中的钙、磷无机盐离子及酪蛋白等物质也具有防龋的效果。本研究试将赤藓糖醇与牛奶配伍,希望既发挥出赤藓糖醇蔗糖替代品的特点及牛奶营养丰富的优点,满足儿童对糖摄入量及生长发育的营养要求,又能够在一定程度上减少龋病的发生,探讨赤藓糖醇-牛奶混合液用于龋病预防的可行性及机理,为其安全广泛的使用提供实验依据。
　　方法:
　　1.构建体外人工龋模型
　　采用细菌诱导法,选择变异链球菌(Streptococcusmutans,S.mutans)作为致龋菌种。在培养的第6h、12h、24h、36h、48h、60h和72h通过测定釉质块表面附着生物膜的光密度值来绘制生物膜生长曲线。测定釉质表面显微硬度值,至与建模前差异有统计学意义时停止实验,根据硬度值的改变判断是否形成早期的釉质龋坏。
　　2.赤藓糖醇-牛奶混合液对变异链球菌生物膜影响的体外研究
　　使用牛心脑浸液(Brain-heart infusion,BHI)、加氟牛奶溶液、牛奶、2％赤藓糖醇-牛奶混合液、4%赤藓糖醇-牛奶混合液、6%赤藓糖醇-牛奶混合液对实验一中建立的体外人工龋模型进行处理。建模120h后,剥离S.mutans生物膜,活菌计数法观察生物膜中活菌总量。激光共聚焦扫描显微镜(Confocal Laser Scanning Microscopy,CLSM)观察细菌生物膜结构,以及计算生物膜不同部位的活菌百分比。
　　3.赤藓糖醇-牛奶混合液对人工龋脱矿釉质影响的体外研究
　　在建模第25d,测量釉质显微硬度值,与建模前比较差异有统计学意义,终止实验。去除表面生物膜后,测量釉质块显微硬度,提示矿物质丢失情况。环境扫描电镜(Environmental Scanning Electron Microscope,ESEM)观察釉质表面显微结构。
　　结果:
　　1.S.mutans生物膜表现出缓慢的非线性生长趋势,6~12h曲线直陡,12~48h变缓,48~72h曲线极为平缓。与实验前相比,人工龋组釉质块经处理后硬度值显著下降(P<0.05),而对照组硬度值无明显变化(P>0.05)。
　　2.BHI组活菌数显著高于其它组(P<0.05);2%赤藓糖醇-牛奶组生物膜活菌数高于4%赤藓糖醇-牛奶组、6%赤藓糖醇-牛奶组的活菌数(P<0.05);4%赤藓糖醇-牛奶组、6%赤藓糖醇-牛奶组、加氟牛奶组生物膜中活菌数差别不大,没有统计学意义(P>0.05)。
　　CLSM观察发现加氟牛奶组、赤藓糖醇-牛奶组生物膜各层的活菌百分比高于BHI组及牛奶组,但生物膜结构松散,细菌疏松分布。
　　3.各组釉质的硬度值均下降(P<0.05);BHI组、牛奶组、2%赤藓糖醇-牛奶组显微硬度损失最多;4%赤藓糖醇-牛奶组、6%赤藓糖醇-牛奶组及加氟牛奶组显微硬度损失小。
　　ESEM观察,BHI组釉质表面凸凹不平破坏最为严重;加氟牛奶组釉质表面平整,沉积了晶体颗粒;牛奶组釉质表面少量颗粒沉积;2%、4%、6%赤藓糖醇-牛奶组釉质表面均较平坦,矿物质颗粒似膜状覆盖,微孔减少;6%赤藓糖醇-牛奶组沉积物最饱满,微孔几乎消失。
　　结论:
　　1.应用该实验方法可以诱导建立出体外人工龋模型所需的S.mutans生物膜,建模终止时牙釉质具备牙釉质早期龋的基本表现,该模型可用于后续的实验研究。
　　2.赤藓糖醇-牛奶混合液能够抑制S.mutans生物膜的生长及粘附,且4%与6%赤藓糖醇-牛奶混合液效果优于2%赤藓糖醇-牛奶混合液。
　　3.各浓度的赤藓糖醇-牛奶混合液均能减轻表层釉质的脱矿程度,促进再矿化的发生,且6%赤藓糖醇-牛奶混合液再矿化作用最强。

目录

封面

声明

目录

英汉缩略语名词对照

中文摘要

英文摘要

前言

实验一 构建体外人工龋模型

1.材料和方法

1.1材料

1.2实验方法

2.结果

2.1 人工龋模型生物膜生长曲线

2.2 釉质块表面显微硬度

3.讨论

实验二 赤藓糖醇-牛奶混合液对变异链球菌生物膜影响的体外研究

1.材料和方法

1.1材料

1.2实验方法

2.结果

2.1各组处理后对生物膜活菌量的影响

2.2激光共聚焦扫描显微镜对各组变异链球菌生物膜结构的观察

3.讨论

实验三 赤藓糖醇-牛奶混合液对人工龋脱矿釉质影响的体外研究

1.材料和方法

1.1材料

1.2实验方法

2.结果

2.1釉质块表面显微硬度

2.2扫描电镜观察牙釉质表面形态

3.讨论

总结与展望

参考文献

牛奶与龋病的关系

致谢