吉西他滨对人乳腺癌MCF-7细胞株CN-Ⅱ、APE/Ref-1 mRNA和蛋白表达的影响

摘要

乳腺癌的发病率在女性恶性肿瘤中居首位,并有逐年增加趋势。早期乳腺癌经手术、放疗、化疗等综合治疗,疗效较好,晚期则失去手术机会,以化疗为主。目前,含蒽环类及紫杉类药物的化疗方案为晚期乳腺癌治疗的首选,尽管疗效显著,仍有20％~30%的患者发生耐药。在晚期乳腺癌的治疗中,对曾经接受过多程化疗、特别是蒽环类及紫杉类药物耐药的患者的后续治疗是目前临床所面临的难题。随着第三代化疗药物如吉西他滨、卡培他滨、长春瑞滨的出现,晚期乳腺癌化疗的效果有了一定程度提高。如何提高二线药物化疗的有效率成为亟待解决问题之一,目前研究主要集中在根据不同的患者个体特征选择最合适的治疗方案,即个体化治疗,使得对不同患者的治疗更具针对性,从而一定程度上提高了化疗疗效,同时也避免无效药物的使用给患者身体及经济上带来的损失。近年来随着分子药理学和分子生物学的发展,人们对肿瘤耐药机制及由基因异常表达导致不同个体对药物治疗反应及预后不同有了进一步的了解和认识,从而也清醒地意识到这是进行肿瘤个体化治疗的基础和条件。
　　目的:研究人乳腺癌MCF-7细胞株经吉西他滨处理时CN-Ⅱ,APE/Ref-1 mRNA和蛋白质表达的变化,并探讨二者在乳腺癌化疗耐药中所起的作用。
　　方法:不同浓度吉西他滨作用于人乳腺癌MCF-7细胞株24h,分别以Real-time PCR及Western blot方法测定用药后CN-Ⅱ,APE/Ref-1的mRNA及蛋白表达情况;以相对耐药低浓度吉西他滨干预MCF-7细胞,流式细胞仪测定0、3、7、10、13和16天细胞凋亡比例,并以Real-time PCR及Western blot方法测定存活细胞CN-Ⅱ,APE/Ref-1的mRNA及蛋白表达情况。
　　结果:吉西他滨作用于人乳腺癌MCF-7细胞株24h后,CN-Ⅱ,APE/Ref-1的mRNA及蛋白表达水平均明显上升,并与吉西他滨的浓度呈正相关。相对耐药浓度药物干预后第0、3、7、10、13和16天细胞CN-Ⅱ、APE/Ref-1的mRNA及蛋白表达水平均逐渐增加,与干预天数成正相关,并与凋亡细胞比例的变化趋势一致,CN-Ⅱ、APE/Ref-1表达水平从第十天起明显增加,第十六天达到最高。并且干预至第10、13、16天后存活的相对耐药细胞中的APE1和CN-ⅡmRNA和蛋白表达水平与非耐药细胞相比,结果具有统计学意义。(P<0.05)
　　结论:CN-Ⅱ,APE/Ref-1在乳腺癌化疗时表达明显增强,可能与化疗耐药性的产生有关,并提示针对CN-Ⅱ,APE/Ref-1的靶向干预可能有助于提高乳腺癌的化疗敏感性。

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前言

第一部分 不同浓度吉西他滨对人乳腺癌细胞CN-Ⅱ、APE／Ref-1表达的影响

材 料 与 方 法

1. 材 料

2. 细胞培养

3. 实验分组

4. Real-time PCR

5. 蛋白质免疫印记

结果

1. 测定MCF-7细胞对于A260nm和A280nm波长的吸收值（OD值）比值结果

2.不同浓度GEM干预后24h各基因Real-time PCR结果

3. 不同浓度GEM干预后24h各基因Western blot结果及表达柱形图（图9、10、11）

小结

第二部分 相对耐药浓度吉西他滨对乳腺癌细胞CN-Ⅱ、APE／Ref-1表达的影响

材 料 与 方 法

1. 细胞培养方法

2. 流式细胞检测

3. Real-time PCR

4. 蛋白质免疫印记

5.实验数据的处理

结果

1. 测定MCF-7细胞对于A260nm和A280nm波长吸收值（OD值）比值结果

2. 相对耐药浓度药物持续干预细胞后流式实验结果

3. 50nmol/L GEM干预后第0、3、7、10、13、16天细胞各基因Real-time PCR结果

4. 50nmol/L GEM干预后第0、3、7、10、13、16天细胞各基因Western blot结果及表达柱形图（图21、22、23）

小结

讨论

结论

参考文献

致谢

综述

参考文献：