动脉粥样硬化microRNA表达谱的研究

摘要

目的：
　　筛选出动脉粥样硬化患者与正常对照者之间差异表达microRNA(miRNA),为了解miRNA在动脉粥样硬化发病机制中的作用及课题组进一步研究miRNA靶向调节ⅡA型分泌型磷脂酶A2(sPLA2-ⅡA)表达在动脉粥样硬化发病机制中的作用奠定基础。
　　方法：
　　1、收集厦门大学附属第一医院心血管内科门诊与病房确诊的冠状动脉粥样硬化患者3例，健康对照者3例。所有病例均在胸痛等症状发作后48小时内采集外周血液，分离血清。
　　2、抽提样本总RNA，用标记酶将Hy3TM或Hy5TM荧光集团标记质检合格的RNA,采用Exiqon公司的microRNA芯片进行检测，筛选出差异表达的miRNAs。
　　3、为了进一步验证microRNA芯片结果的可靠性，挑选出11个具有代表性的差异表达miRNAs分子：过表达的hsa-miR-3655、hsa-miR-548ac、hsa-miR-96-5p、hsa-miR-1、hsa-miR-107、hsa-miR-15b-3p、hsa-miR-126-3p，低表达的hsa-miR-4682、hsa-miR-610、hsa-miR-504-5p、hsa-miR-186-3p。采用实时定量PCR方法进行验证，用hsa-miR-423-5p作为内参，所得数据采用2-ΔΔCT方法进行分析。
　　结果：
　　1、用microRNA芯片筛选出差异表达显著改变(上调或下调2倍以上)的miRNAs分子232个，其中过表达2倍以上的的miRNAs分子134个，过表达5倍以上的miRNAs分子15个，过表达10倍以上的miRNAs分子1个，为hsa-miR-548ac；低表达2倍以上的miRNAs分子98个，低表达5倍以上的miRNAs分子20个，低表达10倍以上的miRNAs分子3个为hsa-miR-3155a、hsa-miR-3158-3p、hsa-miR-371b-5p。总体上动脉粥样硬化患者与正常对照者之间差异性表达显著。
　　2、我们挑选出的11个具有代表性的差异表达miRNAs分子，过表达的hsa-miR-3655、hsa-miR-548ac、hsa-miR-96-5p、hsa-miR-1、hsa-miR-107、hsa-miR-15b-3p、hsa-miR-126-3p，低表达的hsa-miR-4682、hsa-miR-610、hsa-miR-504-5p、hsa-miR-186-3p，经实时定量PCR验证，结果与芯片结果基本吻合。
　　结论：
　　1、动脉粥样硬化患者与正常对照者之间miRNAs差异表达显著，建立了动脉粥样硬化miRNAs的完整表达谱。为探讨miRNA在动脉粥样硬化发病机制中的作用提供有效和准确的分子学依据。
　　2、通过运用microRNA芯片筛选出动脉粥样硬化差异表达miRNAs，并经实时定量PCR验证，结果与microRNA芯片表达趋势一致，说明microRNA芯片结果真实可靠，可用于后续研究。
　　3、为下一步研究miRNA靶向调节sPLA2-ⅡA表达在动脉粥样硬化发病机制中的作用奠定了基础。

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中文摘要

英文摘要

前言

材料和方法

一 . 材料

1、研究对象

2、诊断与排除标准

3、主要试剂和仪器设备

二 . 方法

1、血清的采集

2、样品的RNA抽提

3、RNA纯化及质控

4、miRNA的荧光标记

5、miRNA芯片杂交

6、芯片扫描

7、数据分析

8、实时荧光定量PCR（Ream-time PCR）验证差异表达的miRNAs

三． 统计学方法

结果

1、样本总RN A提取质检结果

2、miRNA数据质量评估

3、芯片样品杂交信号相关性

4、miRNA芯片杂交信号原始扫描结果

5、芯片筛查结果

6、差异表达miRNAs聚类分析

7、选取的差异表达miRNAs实时荧光定量PCR验证结果

8、miRNA芯片结果与实时定量PCR结果比较

讨论

结论

参考文献

致谢

综述

攻读硕士学位期间完成的文章